皖儀科技離子色譜法測定透明質(zhì)酸中的季銨鹽

引言

透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid，HA)，又稱玻尿酸，是一種酸性粘多糖。透明質(zhì)酸以其獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)在機(jī)體內(nèi)顯示出多種重要的生理功能，如潤滑關(guān)節(jié)，調(diào)節(jié)血管壁的通透性，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，水電解質(zhì)擴(kuò)散及運(yùn)轉(zhuǎn)，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合等。具有較高臨床價(jià)值的生化藥物，廣泛應(yīng)用于各類眼科手術(shù)，如晶體植入、角膜移植和抗青光眼手術(shù)等。還可用于治療關(guān)節(jié)炎和加速傷口愈合。將其用于化妝品中，能起到獨(dú)特的保護(hù)皮膚作用，可保持皮膚滋潤光滑、細(xì)膩柔嫩、富有彈性，具有防皺、抗皺、美容保健和恢復(fù)皮膚生理功能的作用。

透明質(zhì)酸是人體皮膚組成成分之一，并且具有良好的保濕作用，目前被廣泛用于第四代化妝品中，被譽(yù)為理想的天然保濕因子，國際上添加HA的化妝品種類已從最初的膏霜、乳液、化妝水、精華素膠囊、膜貼擴(kuò)展到溶液、粉餅、口紅、洗發(fā)護(hù)發(fā)劑、摩絲等，應(yīng)用日趨廣泛。但天然透明質(zhì)酸存在穩(wěn)定性較差，易發(fā)生降解和親水性過強(qiáng)等缺點(diǎn)，限制了其應(yīng)用，因此通過對(duì)透明質(zhì)酸進(jìn)行修飾改性，從而實(shí)現(xiàn)新的生物活性和功能，最常見的一種改性透明質(zhì)酸就是透明質(zhì)酸的季銨鹽。季銨鹽作為常規(guī)的陽離子，可以采用離子色譜進(jìn)行測試。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1測試條件

儀器：IC6200系列離子色譜儀配置陽離子抑制器

色譜柱：陽離子分析柱柱溫：30℃；

流速：1ml/min；

進(jìn)樣量：25μL；

檢測器：電導(dǎo)檢測器

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

淋洗液：10mM 甲烷磺酸溶液等度淋洗；

氯化鈉溶液：稱取7g氯化鈉，用水溶解并定容至100mL,配制成0.07g/mL的氯化鈉溶液。

氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉4g，用水溶解并定容至100mL,配制成1mol/L的氫氧化鈉溶液。

標(biāo)樣：2,3-二羥基丙基-三甲基氯化銨標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度97%）；

鈉離子標(biāo)準(zhǔn)溶液：ρ（K⁺）=1000mg/L

銨根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液：ρ（NH4⁺）=1000mg/L

樣品：客戶提供    

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取0.0871g季銨鹽（2,3-二羥基丙基-三甲基氯化銨），用去離子水溶解并定容至50mL，濃度為1690mg/L。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密移取0.1ml、0.2ml、0.4 ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，置于6個(gè)10mL容量瓶中，加超純水定容至標(biāo)線，混勻，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度梯度表見表1；

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度梯度表

1.4 樣品溶液配制

稱取待測樣品0.2139g于25mL容量瓶中，加入2mL氫氧化鈉溶液，5mL水，充分混勻后置于上45℃恒溫水解2h，水解完成后加入2mL氯化鈉溶液和10mL乙腈，混勻，放置室溫，隨后精確定容至刻度，充分混合均勻，待透明質(zhì)酸沉降后取上清液1mL，加入1mL氯化鈉溶液、5mL乙腈，用水定容至10mL，即得待測樣品溶液。

2 測試結(jié)果

2.1 干擾實(shí)驗(yàn)測試

在前處理中可能引入的鈉離子和銨根離子，需要進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)。按照“1.1“項(xiàng)測試條件進(jìn)行測試，得到干擾性測試圖譜，2,3-二羥基丙基-三甲基氯化銨在測試色譜條件下出峰良好，且與前處理中可能引入的鈉離子和銨根離子保留時(shí)間差距明顯，不會(huì)形成干擾。干擾性實(shí)驗(yàn)測試圖譜見圖1。

             圖1 陰離子測試圖譜

2.2 標(biāo)曲測試

標(biāo)準(zhǔn)曲線系列濃度見表1，按照1.1的測試條件進(jìn)行測試，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線譜圖多點(diǎn)重疊譜圖如圖2，待測離子在該色譜條件下標(biāo)準(zhǔn)曲線線性均大于0.9999，線性良好，線性方程如下表2。

        圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線譜圖多點(diǎn)重疊色譜圖

           表2 陰離子線性方程

2.3 樣品測試

按照“1.1"項(xiàng)色譜條件，連續(xù)注入數(shù)針樣品溶液進(jìn)樣分析，測得樣品圖譜見圖3。連續(xù)3針測試數(shù)據(jù)見表3

          圖3 樣品連續(xù)3針測試重疊圖譜

           表3 樣品連續(xù)3針測試數(shù)據(jù)

3 結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)了在淋洗液體系中不加入乙腈相條件下的有效色譜分離與定性，避免了有機(jī)相對(duì)離子色譜系統(tǒng)的損傷；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在本次實(shí)驗(yàn)中，儀器基線平穩(wěn)、背景值低、季銨鹽色譜峰無雜峰干擾、無明顯拖尾、保留時(shí)間穩(wěn)定、滿足定量需要。