小鼠神經少突膠質前體細胞
產品名稱 ：小鼠神經少突膠質前體細胞
產品貨號 ：YLK-XB0946h
組織來源 ：腦組織
產品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
神經少突膠質前體細胞分離自腦皮層組織。大腦分左右兩個半球，大腦皮質(灰質) 覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。少突膠質細胞分布于中樞神經系統(tǒng)，在銀浸染標本中，少突膠質細胞比星狀膠質細胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞。少突膠質細胞(oligodendrocyte) 是中樞神經系統(tǒng)(C N S) 的成髓鞘神經膠質細胞，其發(fā)育要經歷少突膠質細胞祖細胞、前少突膠質細胞祖細胞、未成熟和成熟少突膠質細胞等階段。
有學者將少突膠質細胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型。但是，細胞發(fā)育是一個連續(xù)的過程，其形態(tài)、表達產物和功能的演變沒有嚴格的界限，因此，其分類是相對的。這三型分別為：Ⅰ型少突膠質細胞又稱前O 2A (pre-O 2A p ro genitorcell) 。細胞呈圓形，表面光滑，直徑約3μm，體外混合培養(yǎng)時成簇生長在星形膠質表面，具有很強的分裂增殖潛力，表達神經節(jié)/苷脂GM 1、波形蛋白和多唾液酸—神經粘附分子(polysialic acid -neuralcellad h esionmolecule，P SA-NCAM ) 等。Ⅱ型少突膠質細胞胞體常有雙極或三極突起，極少數為單極突起，直徑約7μm ，有一定的分裂增殖能力。體外培養(yǎng)時為雙潛能細胞，既可分化為少突膠質細胞又可分化為Ⅱ型星形膠質，故又稱為少突膠質細胞-Ⅱ型星形膠質祖細胞(oligo d en d ro cyte-typ e-2astro cyte p ro genitorcell，O 2A) 。O 2A除表達G M 1和波形蛋白外還表達神經節(jié)/苷脂G D 3和G Q(淋巴雜交瘤株A 2B5產生G Q 的抗體) ，故常用A 2B5抗體標記O 2A 。Ⅲ型少突膠質細胞不再具有分裂增殖能力，為分裂終期細胞。
直徑約10μm 。根據其形成髓鞘的能力，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質細胞。不成熟的O L胞體常伸出4～5條較粗大突起，表面還殘留有A 2B5標記物，同時也表達O 1-O 4抗原，無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質細胞突起有如蜘蛛網，大量表達半乳糖腦苷脂(galactocerebro side，G C ) 、蛋白脂蛋白(proteiolipidprotein，PLP) 、髓鞘堿性蛋白(m yelin basic protein，M BP) 等，有對軸突髓鞘化的能力。體外培養(yǎng)的少突膠質細胞前體細胞(簡稱少突膠質細胞前體細胞) 包括前O 2A 和O 2A 和未成熟少突膠質細胞，前兩者具有增殖能力。
質量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml)
培 養(yǎng) 基 ：含B-27 Supplem ent、PD G F、bFG F、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2天半量換液1次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：雙極、多極形
傳代特性 ：不傳代，不增值，存活1-2周
傳代比例 ：不傳代
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相：空氣，95% 。C O2，5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化。
3) 經1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和公司技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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