大鼠肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
產(chǎn)品名稱(chēng) ：大鼠肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào) ：YLK-XB1289h
組織來(lái)源 ：肺小動(dòng)脈組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自肺小動(dòng)脈組織；肺動(dòng)脈干是短而粗的動(dòng)脈，自右心室的動(dòng)脈圓錐起始，向左后上方斜升，先在升主動(dòng)脈根部的前面，繼而至其左側(cè)，至主動(dòng)脈弓的下方，約在第5胸椎高度，分為左、右肺動(dòng)脈。左肺動(dòng)脈較短，橫行向左，經(jīng)左主支氣管前方至左肺門(mén)，分兩支進(jìn)入左肺的上、下葉。右肺動(dòng)脈較長(zhǎng)，橫行向右，經(jīng)主動(dòng)脈升部和上腔靜脈的后方達(dá)右肺門(mén)，分3支進(jìn)入右肺上、中、下葉。左、右肺動(dòng)脈的各分支在肺實(shí)質(zhì)內(nèi)又反復(fù)分支，與支氣管的分支伴行，最后達(dá)肺泡壁，形成稠密的毛細(xì)血管網(wǎng)。
肺動(dòng)脈輸送的是含二氧化碳較多的靜脈血。在肺動(dòng)脈干分叉處稍左側(cè)與主動(dòng)脈弓下緣之間有一結(jié)締組織索，稱(chēng)動(dòng)脈韌帶。管徑在0.3～1m m 之間，為小動(dòng)脈（sm all-artery），小動(dòng)脈包括粗細(xì)不等的幾級(jí)分支，也屬肌性動(dòng)脈。較大的小動(dòng)脈，內(nèi)膜有明顯的內(nèi)彈性膜，中膜有幾層平滑肌，外膜厚度與中膜相近，一般沒(méi)有外彈性膜?？趶皆?m m 以下的動(dòng)脈，管壁有完整的平滑肌層及少量的彈性纖維和膠質(zhì)纖維。小動(dòng)脈是決定周?chē)h(huán)阻力大小的主要因素，也是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“總開(kāi)關(guān)"。典型的小動(dòng)脈，其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2。中膜的肌層相對(duì)比其他動(dòng)脈為厚，當(dāng)平滑肌在神經(jīng)支配下強(qiáng)力收縮時(shí)，其管腔可以wan全閉塞，而使血液不能流入它所分布的毛細(xì)血管內(nèi)，從而增加了周?chē)貉h(huán)的阻力。如果有許多小動(dòng)脈同時(shí)收縮，可使血壓顯著上升。反之，當(dāng)小動(dòng)脈的平滑肌舒張時(shí)，則可使大量的血液流入毛細(xì)血管，外周阻力明顯下降，血壓降低。
終末小動(dòng)脈(terminalarteri-ole)的口徑為20～30μm ；后小動(dòng)脈(m etar-teriole)，又稱(chēng)毛細(xì)血管前小動(dòng)脈(p recapil-lary arte riole)的口徑為12～15μm 。管壁內(nèi)均有較稀疏的平滑肌，在毛細(xì)血管前小動(dòng)脈分支的起始部分，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛細(xì)血管前括約肌(precapillary sphin c-ter)，其收縮或舒張，可調(diào)節(jié)真毛細(xì)血管的血流量，是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“分開(kāi)關(guān)"。支配小動(dòng)脈平滑肌的交感神經(jīng)纖維，可延伸到終末小動(dòng)脈和后小動(dòng)脈的平滑肌細(xì)胞。在毛細(xì)血管前括約肌上交感神經(jīng)纖維特別豐富。肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層多角形鋪路石狀分布，該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡、合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用。
質(zhì)量檢測(cè)
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ： PLL（0.1m g/ml），明膠（0.1%）
培 養(yǎng) 基 ： 基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、EG F、bFG F、IG F、V EG F、H eparin、H ydrocor
tisone、P enicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 ： 貼壁
細(xì)胞形態(tài) ： 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 ： 可傳2-3代
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴(lài)氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，胰/酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。
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