目錄:優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司>>科研細(xì)胞>>細(xì)胞系>> 復(fù)蘇/凍存MC38+luc 小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞+luc
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更新時(shí)間:2024-07-13 13:38:13瀏覽次數(shù):258評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
---|---|---|---|
貨號(hào) | YLK-XB1616h | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | MC38+luc |
MC38+luc 小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞+luc
細(xì)胞特性:
1) 來(lái)源:結(jié)腸癌
2) 形態(tài):上皮樣,半貼壁半懸浮細(xì)胞
3) 含量:>1x10^6 細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
細(xì)胞篩選
該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其Luc熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。
建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。
初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完培維持培養(yǎng),若無(wú)細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完培繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過(guò)程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完培正常培養(yǎng)。
運(yùn)輸和保存:
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的注意事項(xiàng):
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完培6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完培來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備 DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 85%
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10%
MEM NEAA非必需氨基酸 1%
Sodium Pyruvate丙酮酸鈉 1%
GlutaMAX-1谷氨/酰胺 1%
HEPES 1%
P/S青霉/素-鏈霉/素 1%
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存細(xì)胞:凍存細(xì)胞時(shí),用FBS重懸細(xì)胞,然后加入一定量的DMSO,輕輕混合均勻后移入到凍存管中,DMSO終濃度為10%。
細(xì)胞處理:
1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完培重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
MC38+luc 小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞+luc
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