牛布魯氏桿菌PCR試劑盒

商品名稱：牛布魯氏桿菌PCR試劑盒

Name     ：Brucella Bovis PCR Kit

牛布魯氏桿菌（Brucella bovis，又叫Brucella abortus）又叫流產(chǎn)布氏桿菌，是一種革蘭氏陰性的不運(yùn)動細(xì)菌，無莢膜（光滑型有微莢膜），觸酶、氧化酶陽性絕對嗜氧菌，可還原硝酸鹽，細(xì)胞內(nèi)寄生，可以在牛體內(nèi)存活，也能引起人類疾病。一頭奶牛如果感染布魯氏桿菌，沒有得到及時的清潔和防疫，布病很快會在牲畜群體里暴發(fā)，進(jìn)而增加人被感染的幾率。其特點(diǎn)是生殖器官、胎膜及多種器官組織發(fā)炎、壞死和肉芽腫的形成，引起流產(chǎn)、不孕、睪丸及關(guān)節(jié)炎等癥狀。感染人后可能導(dǎo)致多個器官或臟器系統(tǒng)，骨骼或關(guān)節(jié)的病變，感染組織中可觀察到具有組織學(xué)特征的肉芽腫。晚期可能失去勞動能力、臥床不起、出現(xiàn)神經(jīng)或精神病方面的癥狀。因此牛布魯氏菌的檢測具有重要的意義。本試劑盒根據(jù)PCR原理開發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：

1.   即開即用，用戶只需要提供細(xì)菌DNA模板。

2.   引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增牛布魯氏桿菌。

3.   提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4.   PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5.   本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次。

6.   本產(chǎn)品只能用于科研。

【試劑組成】

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

【自備試劑】

樣品DNA。

【使用方法】

一、樣品DNA的制備

1.   如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。

1.   用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)細(xì)菌DNA提取/試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈送20次免DNA提取的核酸釋放劑，本產(chǎn)品的裂解液可以直接作為PCR模板，省略了DNA提取步驟。其使用手冊可咨詢本公司客服索取。

二、設(shè)置PCR反應(yīng)（40 μL體系）

2.   對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設(shè)置N+4個反應(yīng)。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：

3.  按下表設(shè)置PCR反應(yīng)：

三、電泳檢測

取10-20 μL PCR產(chǎn)物。電泳檢測PCR產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的PCR Mix在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加loading buffer。預(yù)期的PCR產(chǎn)物長度為450bp。陽性對照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí)驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋10倍后重復(fù)PCR擴(kuò)增以排除PCR抑制劑的感染。