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參考價(jià)	面議

科研試劑盒

ELISA試劑盒

PCR試劑盒

生化試劑盒

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	50T
貨號(hào)	YLK10369P	應(yīng)用領(lǐng)域	化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途	科研實(shí)驗(yàn)	英文名稱	Covert Mortality Nodavirus(CMNV) SYBR qRT-PCR Kit
保存條件	低溫運(yùn)輸，-20℃保存	有效期	12個(gè)月
試劑盒說(shuō)明	不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用

偷死野田村病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒偷死野田村病毒(Covert Mortality Nodavirus，CMNV)是一種RNA病毒，主要感染對(duì)蝦，常出現(xiàn)蝦頭發(fā)黑死亡，會(huì)通過(guò)水質(zhì)橫向傳播，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)危害巨大，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。本產(chǎn)品基于PCR原理開(kāi)發(fā)。

詳細(xì)介紹

偷死野田村病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

商品名稱：偷死野田村病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

Name ：Covert Mortality Nodavirus(CMNV) SYBR qRT-PCR Kit

偷死野田村病毒(Covert Mortality Nodavirus，CMNV)是一種RNA病毒，主要感染對(duì)蝦，常出現(xiàn)蝦頭發(fā)黑死亡，會(huì)通過(guò)水質(zhì)橫向傳播，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)危害巨大，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。本產(chǎn)品基于PCR原理開(kāi)發(fā)。它具有下列特點(diǎn)：

1. 一站式，用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對(duì)照。

2.根據(jù)偷死野田村病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。

3.基于染料法qRT-PCR檢測(cè)，靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍，可以達(dá)到至少1000拷貝/反應(yīng)。

4.使用一管式qRT-PCR技術(shù)，RT和PCR兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5.本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR，只能用于科研，不能用于臨床。

【試劑組成】

成份	十孔盒包裝
2×qRT-PCR 緩沖液	500 μL（棕色管）
10×qRT-PCR酶混合液	100 μL（紅蓋）
ROX染料I	50 μL（棕色管）
ROX染料II	50 μL（棕色管）
熒光PCR專用模板稀釋液	1mL（亮黃蓋）
偷死野田村病毒RT-PCR引物混合液	100 μL（白蓋）
偷死野田村病毒RT-PCR陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
核酸釋放劑試用裝	20次（1mL，綠蓋）
使用手冊(cè)	1份

【儲(chǔ)存條件及有效期】

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為12個(gè)月。陽(yáng)性對(duì)照需要因易污染其他成分需要單獨(dú)放置。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供RNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

【自備試劑】樣品RNA

【使用方法】

一、稀釋陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原。

1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。用帶芯槍頭分別加入45 μL 熒光PCR專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。

2. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(本試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

3. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

二、樣品RNA的制備

5. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用10μL上步制備的陽(yáng)性對(duì)照梯度稀釋液中的第4號(hào)（濃度為1×10E4拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝）再加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫?duì)照。

6. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置RT-PCR反應(yīng)（20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR

7. 管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照（用第4號(hào)陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只描述定量分析的步驟，定性分析只是把6個(gè)標(biāo)曲反應(yīng)縮減成1個(gè)，其余不變。

8. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子后最后加）：

成分	N+2個(gè)制備所得樣品	RT-PCR陰性對(duì)照	RT-PCR陽(yáng)性對(duì)照（2-7管）
2×qRT-PCR 緩沖液	10μL	10μL	各10μL
口蹄疫病毒RT-PCR 引物混合物	2μL	2μL	各2μL
50×ROX (見(jiàn)注)	0.4μL	0.4μL	各0.4μL
樣品制備所得RNA模板（來(lái)于第8步）	5.6μL	不加	不加
稀釋所得6個(gè)陽(yáng)性對(duì)照（來(lái)于第6步）	不加	不加	各5.6μL（2號(hào)樣到2號(hào)管，3號(hào)樣到3號(hào)管…）
10×qRT-PCR 酶混合液	2μL	2μL	2μL

注:需使用ROX染料I的機(jī)型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。需使用ROX染料II的機(jī)型：：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的Chromo4、Opticon（II）Corbett Rotor Gene 3000。

不需要使用ROX的機(jī)型：Thermal Cycle Dice Real Time System， LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene 3000、RotorGene 6000。

9. 上機(jī)后按下面參數(shù)進(jìn)行RT-PCR（參數(shù)可能會(huì)因儀器不同而需優(yōu)化）。

過(guò)程	溫度	時(shí)間
RT（逆轉(zhuǎn)錄）	50℃	15-30分鐘
預(yù)變性	94℃	2分鐘
RT - PCR反應(yīng) （30個(gè)循環(huán)）	95℃	15 秒
	60℃	15 秒（采集FAM通道的熒光信號(hào)）
	72℃	15 秒
按儀器預(yù)設(shè)程序進(jìn)行溶解曲線分析

四、數(shù)據(jù)處理

10. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA濃度的log值，再推算出其濃度。

11. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照Ct必須大于或等于40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于35則為陽(yáng)性。如果在35-40之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40，則為陽(yáng)性。