【產(chǎn)品名稱】

通用名：布魯氏菌病抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Brucella（ELISA）

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 布魯氏菌病是由布魯氏菌（Brucella）引起的人、畜共患傳染病，其特征是生殖器官和胎膜炎，引起流產(chǎn)、不育和各種組織的局部病灶。

本試劑用于檢測牛、羊血清中布魯氏桿菌抗體，可用于布魯氏菌疫苗免疫效果評價或該病的輔助診斷。

【原    理】

    本試劑盒由預(yù)包被布魯氏菌抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體工作液及其他配套試劑組成，應(yīng)用競爭酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測牛羊血清、血漿樣本中布魯氏菌抗體。實(shí)驗(yàn)時在酶標(biāo)板中加入待檢樣本及酶標(biāo)記物、抗體工作液，經(jīng)溫育后若樣品中含有布魯氏菌抗體，則將與抗體工作液競爭結(jié)合酶標(biāo)板上抗原，酶標(biāo)記物與抗體工作液及酶標(biāo)板上抗原形成復(fù)合結(jié)合物；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有布魯氏菌抗體則將阻斷酶標(biāo)記物、抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有布魯氏菌抗體。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮，使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

3.用工作洗滌液將待檢牛血清先按10倍稀釋（如5μl血清加入45μl工作洗滌液中，混勻），待檢羊血清按25倍稀釋（如2ul血清加入48ul工作洗滌液中，混勻），陰、陽性對照不用稀釋。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔先加入稀釋后的血清樣品50μl。

然后每孔依次加入50ul酶標(biāo)記物、50ul抗體工作液。

4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水浴）避光反應(yīng)45分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。

6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)15分鐘。

7.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對照吸光值≥1.0，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1. PI（阻斷率）=（1- ）×100%，PI≥50%為陽性；PI＜50%為陰性。

2. 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性時表明動物樣本含有布魯氏菌抗體，需結(jié)合臨床及其他方法進(jìn)行分析。

【試驗(yàn)方法的局限性】

本檢測結(jié)果僅供篩查，不作為確診依據(jù)。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以*溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號試劑組分不得混用。