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如何正確操作使用蛋白純化填料?

閱讀:630      發(fā)布時間:2023-6-26
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  蛋白質是細胞的重要組成部分,對維持生命活動起著至關重要的作用。為了進一步對蛋白質進行研究和利用,需要對其進行純化,純化是從混合樣品中分離出目標蛋白質的過程。而蛋白純化填料作為純化過程中*重要組成部分,起著至關重要的作用,主要是是指用于吸附和分離蛋白質的固相填料,通常包括離子交換樹脂、親和層析樹脂、凝膠過濾材料等。其中,離子交換樹脂和親和層析樹脂是目前應用廣泛的純化填料。
 
  離子交換樹脂是指具有陰、陽離子交換基團的樹脂,可以根據(jù)蛋白質表面所帶的電荷性質,選擇相應的陰、陽離子交換樹脂進行選擇性吸附和分離。離子交換樹脂操作簡單、效率高、適用范圍廣,但可能會造成蛋白質結構損傷和純化效果不理想等問題。
 
  親和層析樹脂則是根據(jù)蛋白質的特異性結合性,通過選用匹配的親和劑進行選擇性吸附和分離。比如,親和層析樹脂可以利用抗體來選擇性吸附和純化所需的蛋白質,也可以利用金屬離子和His標記來選擇性吸附和純化蛋白質。親和層析樹脂具有選擇性強、結構損失小等優(yōu)點,但成本較高。
 
  除此之外,還有凝膠過濾材料,其通過蛋白質在凝膠孔洞中的分子大小、形狀等性質的差異進行選擇性純化。凝膠過濾材料可根據(jù)自身需要進行不同孔徑的填充,由于對蛋白質的結構影響小,因此也被廣泛應用于蛋白質純化中。
 
  蛋白純化填料使用時需注意:
 
  1.定期更換緩沖液:選擇合適的緩沖液和保護劑,定期更換。
 
  2.定期清洗填料:采用PH調節(jié)、超聲波、化學法等方法,去除阻塞物和雜質。
 
  3.避免高溫、干燥:避免填料暴曬于陽光下,避免高溫、干燥造成填料的老化和破壞。
 
  4.避免受力過大:避免填料受到過大的擠壓和撞擊。
 
  5.定期檢查:定期檢查填料的狀態(tài)和性能,避免使用失效或損壞的填料。

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