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液相色譜建立梯度洗脫的方法
閱讀：6614 發(fā)布時(shí)間：2015-11-16
液相色譜儀建立等度洗脫方法的主要步驟如下：
1 選擇基本色譜條件：
色譜柱：15mm×4.6mm或25mm×4.6mm，C8或C18反相填料，5μm粒度。
流動(dòng)相：水-乙腈（5~100%）B可變。
梯度時(shí)間為：25min（2mL/min）到50min（1mL/min）。
2 調(diào)整梯度范圍
盡可能減少分離開(kāi)始和結(jié)束時(shí)的時(shí)間浪費(fèi)（沒(méi)有色譜峰只走基線。
3 調(diào)整分離度
如果色譜圖有很多峰分離度不好，可以延長(zhǎng)tG，要延長(zhǎng)天G可以增加柱長(zhǎng)，減小填料的顆粒度，降低流動(dòng)相速度。調(diào)節(jié)tG、流動(dòng)相速度和柱尺寸來(lái)保持平均容量因子值。
4 調(diào)節(jié)峰容量
調(diào)節(jié)到色譜圖中能容納所有的峰，改變流速以便使峰與峰的距離合適
5 如果要進(jìn)一步改變峰間距，就改變有機(jī)溶劑的成分。
6 如果樣品的相對(duì)分子質(zhì)量大于500，就按S比例增加tG。S 可按下面數(shù)據(jù)進(jìn)行估計(jì)：
樣品相對(duì)分子質(zhì)量 | S | 樣品相對(duì)分子質(zhì)量 | S |
100 1000 | 4 10 | 10000 100000 | 30 100 |