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各類(液相色譜法)HPLC的特點及應(yīng)用
色譜法(HPLC),zui早是俄國植物學(xué)家M.Tswett于1906年提出。經(jīng)典液相色譜法是在常溫常壓下進(jìn)行,運行速度慢,柱效低,不能在線檢測。HPLC克服了經(jīng)典液相色譜這一系列缺點,且具有以下優(yōu)點:分離效率高、分析速度快、靈敏度高、色譜柱可反復(fù)使用、流動相可選擇范圍廣、流出組分易分離、均采用計算機(jī)控制色譜條件和色譜的處理程序均在線檢測等。
1 按照功能(用途)分類 :
(1)分析型。分析型HPLC主要用于樣品的檢測以及定性、定量分析。在使用時樣品和洗脫液通常廢棄,其目的主要是全面獲得樣品的組成信息。
(2)制備型。制備型HPLC是基于液相色譜法的各大優(yōu)點用于樣品的分離、富集或純化。目前,其在中藥研究領(lǐng)域中的應(yīng)用主要有標(biāo)準(zhǔn)品的制備和樣品的純化分離等。
2 按照分離原理分類 :
分配色譜(按照固定相和流動相的極性可分為正相分配色譜和反向分配色譜)、吸附色譜、離子交換色譜、離子對色譜、尺寸排阻色譜和膠束色譜等。其中常用的有分配色譜和離子對色譜。 (1)分配色譜。分配色譜中的反向分配色譜是目前在液相色譜法中使用,它占整個HPLC應(yīng)用的80%左右。一般用非極性固定相(如C18、C8);流動相為水或緩沖液,常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水相溶的有機(jī)溶劑調(diào)節(jié)保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。
(2)離子對色譜法。常用ODS柱,流動相為甲醇-水或乙腈-水,水中加入離子對試劑,在一定的pH值范圍內(nèi)進(jìn)行分離。被測組分時間與離子對性質(zhì)、濃度、流動相組成及其pH值、離子強(qiáng)度有關(guān)。主要用于離子型化合物的分離分析。