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液相色譜儀色譜柱的分離條件
多數(shù)液相色譜儀色譜柱有很寬的試驗(yàn)條件范圍,但具體應(yīng)用又受到限制,主要是pH值、柱溫和流動相的選擇。
傳統(tǒng)硅膠為基質(zhì)的鍵合相要求pH值在2~8之間,pH值的流動相能“溶解"硅膠,使鍵合相流失。結(jié)構(gòu)非堿性組分的保留不斷減少,堿性組分的保留增加,引起堿性組分峰變寬。如果一定要用高或低pH值的流動相,可加保護(hù)柱。保護(hù)柱裝在泵和進(jìn)樣閥之間,用分析柱相同的填料填裝,或用普通硅膠。硅膠飽和了流動相,減少了分析柱填料的損失。保護(hù)柱不要求柱效高,用價格低的一般硅膠疏松的填裝,按期檢查硅膠的溶解情況。用保護(hù)柱也有不利的影響,即新流動相難以平衡,保留時間不穩(wěn)定或穩(wěn)定慢。使用了保護(hù)柱一定要加流路過過濾器,以防止硅膠微粒引起的麻煩。目前很多檢測儀器廠商開發(fā)了滿足低或高pH值緩沖液的色譜柱填料,具有很好的穩(wěn)定性。
以硅膠為基質(zhì)的柱和陰離子交換柱超過60℃后,會增加對流動相中化學(xué)物質(zhì)的吸附。在高溫下用小顆粒柱引起床塌陷,降低柱效,改變峰形。
有些流動相中的溶劑不能用于某些柱,如小顆粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色譜。另一方面,有些柱與某些溶劑一旦達(dá)到平衡,不要隨意改用其它溶劑。