CNBr純化磁珠產(chǎn)品介紹：

CNBr純化磁珠在制備和使用定制親和層析介質(zhì)方面具有良好的記錄。 將生物特異性配體與 CNBr 活化的瓊脂糖偶聯(lián)是一種廣泛使用、成功且有據(jù)可查的技術(shù)。 偶聯(lián)反應(yīng)是自發(fā)的、快速的并且易于進(jìn)行。 不需要有毒化學(xué)品或特殊設(shè)備。

這種預(yù)激活的 SepFast 珠子可以很容易地用于制造各種親和層析介質(zhì)，適用于小規(guī)模和大規(guī)模純化應(yīng)用。 應(yīng)用領(lǐng)域包括蛋白質(zhì)、多肽和核酸的固定化。

CNBr純化磁珠產(chǎn)品特性：

CNBr 活化的 SepFast 4 High Flow (4HF) 由高度交聯(lián)的 4% 珠狀瓊脂糖制成。 它顯示出高機(jī)械剛度，可在降低背壓的情況下實(shí)現(xiàn)高流量。

由于瓊脂糖具有出色的親水性和低非特異性結(jié)合特性，長(zhǎng)期以來(lái)一直用于色譜分離。 這些顆粒具有開(kāi)孔結(jié)構(gòu)，對(duì)大蛋白質(zhì)分子具有出色的傳質(zhì)特性。

基礎(chǔ)基質(zhì)與溴化氰 (CNBr) 反應(yīng)生成活性基團(tuán)，這些活性基團(tuán)與待固定分子中的伯胺基團(tuán)反應(yīng)。 CNBr 活化的 SepFast 培養(yǎng)基以用添加劑穩(wěn)定的凍干粉形式提供。

產(chǎn)品使用流程：

1.以下是配體一般的偶聯(lián)流程。

（1）將目標(biāo)配體溶解在含有0.5M NaCl的0.1M NaHCO3，pH 8.3的偶聯(lián)緩沖液中。對(duì)于蛋白質(zhì)配體，凝膠濃度為5-20 mg/ml。對(duì)于小配體，制作1-10µmol/ml凝膠。偶聯(lián)緩沖液的體積應(yīng)與固定凝膠的體積相同。

（2）稱(chēng)取所需的粉末（1g干粉提供約9?12 ml的沉降填料）并將其懸浮在預(yù)冷的1mM HCl中（1g干粉使用20 ml預(yù)冷的1mM HCl）。讓填料在低溫下膨脹2-3分鐘。

（3）快速去除過(guò)濾裝置中的液體。

（4）將洗凈吸干的凝膠轉(zhuǎn)移到偶聯(lián)緩沖液中。

（5）漿液在4℃下混合過(guò)夜或在室溫下混合3-4小時(shí)。

（6）用至少5倍凝膠體積的偶聯(lián)緩沖液清洗凝膠。

（7）將凝膠重新懸浮到相同體積的封閉溶液中，0.1M Tris/HCl，pH 8.0或1M乙醇胺pH 8.0，持續(xù)2 - 3小時(shí)。

（8）用5倍體積的0.1M Tris/HCl+1M NaCl，pH8.0洗滌凝膠，然后用5倍體積的0.1M醋酸鹽緩液+1M NaCl，pH4.0洗滌凝膠。

（9）使用前用工作/平衡緩沖液清洗凝膠。

2. 固定化效率的一般考慮

（1）pH

pH 8.3的緩沖液常用于蛋白質(zhì)固定。然而偶聯(lián)pH值可在6-10之間進(jìn)行優(yōu)化以獲得最佳結(jié)果（如：高偶聯(lián)產(chǎn)率和高配體活性）。注意：配體溶解后要調(diào)節(jié)偶聯(lián)pH值。

（2）偶聯(lián)方案

應(yīng)避免使用含有氨基的溶液?？梢砸胂♂尩哪承┯袡C(jī)溶劑以提高配體的溶解度。應(yīng)事先測(cè)試此類(lèi)溶劑的適用性。

（3）鹽

偶聯(lián)緩沖液中鹽的存在可以提高固定效率。

（4）基礎(chǔ)基質(zhì)中的活化基團(tuán)

對(duì)于某些配體或應(yīng)用，基礎(chǔ)基質(zhì)中的活化水平可能過(guò)高，偶聯(lián)配體的活性可能會(huì)降低。在降低的pH值下偶聯(lián)可能會(huì)減少配體分子的連接點(diǎn)。它可以提高偶聯(lián)配體的活性?；罨鶊F(tuán)的受控水解，例如在添加配體前幾個(gè)小時(shí)用偶聯(lián)緩沖液孵育凝膠，也可以減少過(guò)度偶聯(lián)問(wèn)題。

（5）屏蔽剩余的活化配體

未與配體反應(yīng)的活化基團(tuán)應(yīng)通過(guò)添加額外的含有pH 8 - 9伯胺的小分子（例如Tris或乙醇胺）來(lái)封端。

（6）最終填料的洗滌

偶聯(lián)反應(yīng)后需要將未連接或弱連接的配體洗掉。采用高pH值和低pH值交替的洗滌方法可以確保有效去除不需要的物質(zhì)。

3. 固定化親和填料的使用

配體偶聯(lián)填料可用于使用間歇攪拌罐模式或填充柱模式的純化。處理這種材料遵循與處理其他基于瓊脂糖基質(zhì)相同的原則。

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