細(xì)菌計(jì)數(shù)
細(xì)菌細(xì)胞計(jì)數(shù)是建立或監(jiān)測(cè)細(xì)菌生長(zhǎng)速度、確定種群倍增時(shí)間所必需的。細(xì)菌培
養(yǎng)物可以通過(guò)測(cè)定活細(xì)胞數(shù)來(lái)確定，活細(xì)胞數(shù)是每 mL 的菌落形成單位數(shù)
(CFU/mL)，或者通過(guò)使用分光光度計(jì)測(cè)量 600 nm 處的光密度（OD600）來(lái)間接
分析細(xì)胞總數(shù)。必須指出的是，細(xì)菌的生長(zhǎng)速度和培養(yǎng)要求在不同菌種之間可能
有很大的差異，因此很難用同一種方式量化所有的細(xì)菌。下面，科博瑞 提供了一
個(gè)關(guān)于如何確定細(xì)菌細(xì)胞計(jì)數(shù)的一般程序。
活體計(jì)數(shù)：
為了計(jì)數(shù)細(xì)菌懸浮液中的 CFU，從活躍的細(xì)菌液體培養(yǎng)物中吸取一定的體積在
適當(dāng)?shù)囊后w介質(zhì)中稀釋。稀釋的程度將取決于菌株的生長(zhǎng)速度和階段。為了準(zhǔn)確
測(cè)定活細(xì)胞數(shù)，應(yīng)準(zhǔn)備一系列稀釋液和相應(yīng)的平板。要確定稀釋度，請(qǐng)使用以下
公式：
例如，如果 1.0mL 的原菌液與 9.0mL 的稀釋劑混合，稀釋度是 1/(1+9)或 1/10。
這是 1 到 10 的稀釋度，因?yàn)橐粋€(gè)體積被稀釋到總共 10 個(gè)體積。稀釋度也可以寫
成 1：10，或按指數(shù)寫成 10 -1。
在制備稀釋系列之后，每個(gè)稀釋液使用涂布平板技術(shù)無(wú)菌地涂布到幾個(gè)平板上，
然后在最佳條件下生長(zhǎng)。必須注意的是，培養(yǎng)物的體積也應(yīng)該被考慮到最終計(jì)算
的稀釋度中。例如，如果涂布量為 0.1mL，則被視為 1：10 的稀釋度。這是因?yàn)?/span>
最終的細(xì)胞計(jì)數(shù)是以每 mL 的 CFU 數(shù)來(lái)計(jì)算的，而 0.1mL 是十分之一毫升。
注意：這個(gè) 0.1mL 是 科博瑞實(shí)驗(yàn)室平板計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)常用的體積，用的是提前準(zhǔn)備
好的平板，不需要給培養(yǎng)基水浴保溫，可以節(jié)約操作時(shí)間。食品或環(huán)境監(jiān)測(cè)請(qǐng)按
照國(guó)標(biāo)里面的體積要求計(jì)數(shù)
經(jīng)過(guò)一段合適的生長(zhǎng)期后，每個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)量可以被計(jì)數(shù)。為了獲得zui
hao的結(jié)果，只能使用菌落數(shù)在 30-300 之間的平板，因?yàn)檫@將提供細(xì)菌濃度的準(zhǔn)
確表示。要確定 CFU/mL，請(qǐng)使用以下公式：
稀釋倍數(shù)
CFU/mL ? 平均菌落數(shù)
具體來(lái)說(shuō)，計(jì)算一個(gè)稀釋系列的菌落數(shù)量的平均值，然后除以平板上的最終稀釋
度。例如，如果在稀釋度為 10 -7時(shí)（試管 10 倍系列稀釋到 10 -6，取 0.1mL 涂布
平板計(jì)數(shù)），從一組平板中獲得三種計(jì)數(shù)：40、37 和 43，細(xì)菌滴度將為
4.0x10 8CFU/mL。
實(shí)驗(yàn)材料
1 細(xì)菌的液體培養(yǎng)物
2 移液槍
3 酒精燈
4 系列稀釋液
5 涂布棒
6 固體平板
7 酒精棉球
8 旋渦混勻器
操作步驟
1 如上圖所示給稀釋管和瓊脂平板貼上標(biāo)簽（標(biāo)簽很重要，不然容易混淆）。
2 通過(guò)小心地旋轉(zhuǎn)混合物來(lái)輕輕地混合培養(yǎng)物懸浮液
3 無(wú)菌取出 1.0mL 培養(yǎng)物并將其移入 9mL 的 10-1 稀釋液空白中。旋渦混勻器混
勻，混合 10-1的稀釋液。
4 換用新的無(wú)菌槍頭，從 10-1稀釋中取出 1.0mL，轉(zhuǎn)移到 9mL 的 10-2稀釋管中。
旋渦混勻器混勻。
5 在每根試管子之間使用新的槍頭，繼續(xù)連續(xù)稀釋到 10-6（也可以根據(jù)需要繼續(xù)
稀釋）。
6 做完后稀釋系列，回到 10-2稀釋管中。輕輕地旋轉(zhuǎn)樣品。然后用新槍頭，將 0.1mL
轉(zhuǎn)移到瓊脂培養(yǎng)皿中，進(jìn)行平板涂布，做 2-3 個(gè)重復(fù)。將涂布后的平板放置在適
宜的培養(yǎng)環(huán)境中。
7 繼續(xù)吸取后續(xù)的稀釋系列涂布。在適當(dāng)?shù)臏囟群蜕L(zhǎng)周期下，將每一盤瓊脂倒
置培養(yǎng)。
9 選擇有 30-300 個(gè)菌落的培養(yǎng)皿，數(shù)一數(shù)培養(yǎng)皿上的菌落數(shù)。
10 使用菌落計(jì)數(shù)公式來(lái)確定活細(xì)胞計(jì)數(shù)。
注意
這個(gè)文檔整理的方法可以較準(zhǔn)確且便捷地測(cè)定特定條件下培養(yǎng)物的活菌濃度，無(wú)
法計(jì)數(shù)培養(yǎng)物中的死菌濃度，同時(shí)也不能直接等同基因的拷貝數(shù)。實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的
定量操作可以參考本文檔，國(guó)標(biāo)食品或環(huán)境檢測(cè)請(qǐng)按照標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。
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