細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)簡要總結(jié)

 細(xì)胞培養(yǎng)泛指所有體外培養(yǎng)，其含義是指從動(dòng)物活體體內(nèi)取出組織，于模擬體內(nèi)生理環(huán)境等特定的體內(nèi)條件下，進(jìn)行孵育培養(yǎng)，使之生存并生長。細(xì)胞培養(yǎng)工作現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、新藥研發(fā)等各個(gè)領(lǐng)域，成為最重要的基礎(chǔ)科學(xué)之一。

    細(xì)胞培養(yǎng)常用培養(yǎng)基來維持細(xì)胞生長的所需營養(yǎng)，培養(yǎng)基一般分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基中加入一定的凝固劑（如瓊脂）或固體培養(yǎng)物（如麩皮、大米等）便成為固體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基在營養(yǎng)通風(fēng)的表面可培養(yǎng)單個(gè)菌落，在細(xì)胞的分離鑒定、技術(shù)等方面起到相當(dāng)重要的作用。下面來簡單介紹下細(xì)胞培養(yǎng)的過程及注意事項(xiàng)。

細(xì)胞培養(yǎng)前期準(zhǔn)備

1、培養(yǎng)基、血清、胰酶、PBS、培養(yǎng)瓶、滴管、離心管?；?

2、100ml玻璃瓶10個(gè)（用于分裝血清，配成10%培養(yǎng)液）；25-50ml玻璃瓶2個(gè)（裝胰酶）；500ml玻璃瓶2個(gè)（分裝PBS）；?

3、所有玻璃器皿洗凈烘干泡酸再洗凈烘干消毒；塑料或橡膠塞則洗凈烘干蒸餾水煮30min 烘干消毒；

4、酒精燈、鑷子、剪刀、廣口玻璃瓶、消毒用酒精、棉球、吸耳球、酒精噴壺、橡膠手套

細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)　

1、建立細(xì)胞凍存庫，細(xì)胞凍存庫應(yīng)該分主細(xì)胞庫和工作細(xì)胞庫，當(dāng)需要做實(shí)驗(yàn)時(shí)從主細(xì)胞庫中復(fù)蘇細(xì)胞建立工作細(xì)胞庫。每一個(gè)凍存標(biāo)本都應(yīng)明確記錄細(xì)胞的性質(zhì)、代數(shù)及有無污染。

2、進(jìn)行詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)記錄，包括細(xì)胞系的種類及來源、有無污染、細(xì)胞代數(shù)和倍增時(shí)間、以及選擇性突變。經(jīng)過連續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞與它較早代數(shù)的凍存細(xì)胞相比，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，細(xì)胞在適應(yīng)環(huán)境的過程中，其生物特性已發(fā)生了改變。培養(yǎng)的細(xì)胞由若干生長速度及活力各異的亞群組成。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長生長速，度快及活力高的細(xì)胞亞群逐漸占優(yōu)勢(shì)這種選擇性，趨勢(shì)會(huì)影響整個(gè)細(xì)胞群的生物特性。應(yīng)用不同代數(shù)的細(xì)胞連續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)則結(jié)果會(huì)發(fā)生偏差。建立細(xì)胞凍存庫就能避免這種影響通過復(fù)蘇相同代數(shù)的細(xì)胞，人們就能在較為均一的條件下重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

3、為了避免細(xì)胞被外界污染物污染以及操作過程中產(chǎn)生的飛沫限制在超凈工作臺(tái)中。超凈工作臺(tái)需要合理的布置和維護(hù)，工作臺(tái)內(nèi)減少物品，使用時(shí)采用垂直氣流比水平氣流安全。

4、為了避免細(xì)胞發(fā)生污染，在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)培養(yǎng)不同的細(xì)胞系所使用的培養(yǎng)基應(yīng)分開使用。