彎曲桿菌基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法) 返回列表頁

品牌：科博瑞

產(chǎn)品規(guī)格：50T

準(zhǔn)備物品：

清理液（A）毫升

染色液（tB）微升

稀釋液（C）毫升

溶解液（tD）毫升

產(chǎn)品說明書1份

彎曲桿菌基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法)注意事項(xiàng)：

1、基礎(chǔ)程序。

2、擴(kuò)增溫度和延伸溫度。

3、反應(yīng)時(shí)間。

4、循環(huán)次數(shù)。

5、片PCR反應(yīng)液的配制。

6、PCR技術(shù)的基本原理。

7、PCR的反應(yīng)動力學(xué)。

8、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

9、PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

彎曲桿菌基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法)反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

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