低噪音磁性流式熒光編碼微球

流式熒光技術(shù)又稱懸浮陣列或液相芯片，是近年來新興起的多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)，其不僅擁有化學(xué)發(fā)光高靈敏度、高精密度的優(yōu)勢(shì)，同時(shí)具備高通量、高速度、多重指標(biāo)聯(lián)檢等優(yōu)勢(shì)，克服了化學(xué)發(fā)光一次只能檢測(cè)一項(xiàng)指標(biāo)的不足，能夠滿足日益增長(zhǎng)的臨床檢測(cè)需求，有望與化學(xué)發(fā)光形成互補(bǔ)，甚至替代化學(xué)發(fā)光。流式熒光技術(shù)已被逐漸地應(yīng)用到臨床檢驗(yàn)、遺傳分析、藥物開發(fā)、生物醫(yī)學(xué)、藥物基因，以及生物戰(zhàn)的細(xì)菌檢測(cè)等。但是目前國(guó)內(nèi)的高通量流式熒光檢測(cè)微球以進(jìn)口為主，自主研發(fā)尚處于早期階段。

目前流式熒光術(shù)在國(guó)內(nèi)主要用于細(xì)胞因子的檢測(cè)。細(xì)胞因子檢測(cè)是判斷機(jī)體免疫功能的一個(gè)重要指標(biāo)，因而具有重要的研究?jī)r(jià)值，同時(shí)在臨床上有諸多實(shí)用價(jià)值，對(duì)于許多疾病的診斷、病程觀察、療效判斷及細(xì)胞因子治療檢測(cè)都有重要的意義。在判斷機(jī)體免疫功能時(shí)，通常我們需要知道機(jī)體多個(gè)細(xì)胞因子的水平。而流式熒光技術(shù)的發(fā)明就像為檢測(cè)多個(gè)細(xì)胞因子指標(biāo)量身定做的一樣，完滿迎合了這種需要同時(shí)了解多個(gè)指標(biāo)的信息的需求。因此，目前國(guó)內(nèi)基于流式熒光術(shù)的細(xì)胞因子檢測(cè)迅速成為體外診斷的熱點(diǎn)之一，近兩年相關(guān)產(chǎn)品不斷涌現(xiàn)。然而，受制于熒光編碼微球的制備技術(shù)，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上的細(xì)胞因子試劑產(chǎn)品絕大一部分都是國(guó)內(nèi)廠商通過進(jìn)口原料分裝進(jìn)行生產(chǎn)的。而國(guó)際上能夠提供細(xì)胞因子檢測(cè)試劑的主要生產(chǎn)商分別是美國(guó)的BD、Biolegend、AimPlex。這些廠家提供的試劑，微球不具有磁性，不利于發(fā)展相關(guān)的自動(dòng)化儀器。此外，這些商家的微球采用單熒光標(biāo)記，同時(shí)檢測(cè)的指標(biāo)數(shù)量有限，即使采用兩種不同粒徑的微球搭配，也只能同時(shí)檢測(cè)10多種細(xì)胞因子。

此外，盡管流式熒光術(shù)能同時(shí)檢測(cè)多種細(xì)胞因子，但由于正常人的血清中細(xì)胞因子濃度較低，在實(shí)際檢測(cè)中，目前大部分試劑對(duì)正常人血清中各細(xì)胞因子的檢出率不高，一些血清樣本的熒光值甚至低于對(duì)照品濃度為0時(shí)的熒光值，結(jié)果的準(zhǔn)確性不高。究其原因，主要是熒光編碼微球?qū)晒鈾z測(cè)抗體的非特異吸附較強(qiáng)，導(dǎo)致噪音較高（噪音為對(duì)照品為0時(shí)的檢測(cè)熒光值-微球本底檢測(cè)熒光值）。當(dāng)檢測(cè)低值血清樣本中，血清中存在復(fù)雜的蛋白質(zhì)體系，不可避免這些蛋白質(zhì)同樣會(huì)與微球產(chǎn)生非特異性吸附，從而與熒光檢測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)非特異性吸附位點(diǎn)，使最終的熒光檢測(cè)值下降。因此減少熒光編碼微球?qū)晒鈾z測(cè)抗體的非特異性吸附可顯著提升低值血清樣本檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

碧芯生物科技（海南?。┯邢薰就ㄟ^不斷摸索和優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，通過合成特殊的粒徑不同的微球，再用Avidin修飾微球表面，最終構(gòu)建了約60種低吸附的熒光編碼微球。與普通的熒光編碼微球相比，這些被特殊的微球具有對(duì)蛋白質(zhì)低非特異性吸附的特點(diǎn)。因此，用這種包裹好的熒光編碼微球構(gòu)建的抗原檢測(cè)試劑的噪音值明顯降低，可顯著提升靈敏度及低值血清樣本的檢出率