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裂解液使用注意事項(xiàng)
閱讀：2072 發(fā)布時(shí)間：2023-3-27
細(xì)胞裂解液主要作用就是將細(xì)胞膜溶解破壞，使細(xì)胞內(nèi)容物釋放出來，根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的目的不同，裂解液中會加入蛋白酶抑制劑或DNA酶抑制劑，方便目的物的提取。
裂解液使用注意事項(xiàng)：
1. 為取得理想的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融。建議將其適當(dāng)分裝成合適的量，然后置于-20℃保存。
2. 細(xì)胞裂解蛋白提取的所有操作步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
3. 建議在臨用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。PMSF可以向我公司訂購。
4. 在貼壁培養(yǎng)細(xì)胞的操作步驟中，去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗。
5. 如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
6. 在培養(yǎng)細(xì)胞的裂解中，如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50~100萬細(xì)胞/離心管，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。
7. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器或研磨設(shè)備，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器或研磨那樣裂解得比較充分。
8. 如果希望獲得更好的裂解效果，細(xì)菌和酵母可以分別使用溶菌酶和破壁酶消化，然后再使用本裂解液進(jìn)行裂解。
9. 復(fù)融后的試劑請及時(shí)使用，避免裂解液中有效成分失效。