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幾種常見的將細(xì)胞接種到玻片上的方法

時(shí)間：2025/2/24閱讀：475
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以下是幾種常見的將細(xì)胞接種到玻片上的方法：
一、直接滴加法
  1. 準(zhǔn)備工作
    • 首先要準(zhǔn)備好細(xì)胞懸液。細(xì)胞懸液可以通過消化貼壁細(xì)胞獲得，例如對(duì)于貼壁生長的細(xì)胞，用胰蛋白酶 - EDTA 消化液處理細(xì)胞，使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁上脫落，然后加入適量的培養(yǎng)基終止消化，并輕輕吹打制成單細(xì)胞懸液。對(duì)于懸浮細(xì)胞，可以直接收集培養(yǎng)基中的細(xì)胞，離心去除培養(yǎng)基中的雜質(zhì)和舊培養(yǎng)基后，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
    • 選擇合適的蓋玻片。蓋玻片一般需要進(jìn)行消毒處理，可以用 70% - 95% 的乙醇浸泡 30 分鐘左右，然后晾干備用。蓋玻片的大小和厚度根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇，一般常用的尺寸為 18mm×18mm，厚度在 0.17mm 左右。
  2. 接種操作
    • 將蓋玻片放置在培養(yǎng)皿中。培養(yǎng)皿底部可以預(yù)先加入少量的培養(yǎng)基，以防止蓋玻片移動(dòng)。
    • 用微量移液器吸取適量的細(xì)胞懸液（一般根據(jù)細(xì)胞密度和實(shí)驗(yàn)需求，細(xì)胞濃度可能在 1×10? - 1×10? 個(gè) /ml 之間），滴加在蓋玻片的一端。滴加的細(xì)胞懸液體積一般在 10 - 50μl 左右，具體體積取決于蓋玻片的大小和細(xì)胞所需的接種面積。
    • 輕輕傾斜培養(yǎng)皿，使細(xì)胞懸液沿著蓋玻片緩慢流下，均勻地分布在蓋玻片表面。然后將培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱中，讓細(xì)胞在適宜的溫度（如 37℃）和二氧化碳濃度（一般為 5%）環(huán)境下附著和生長。
二、使用細(xì)胞爬片法
  1. 準(zhǔn)備工作
    • 和直接滴加法類似，準(zhǔn)備好細(xì)胞懸液和消毒后的蓋玻片。
    • 在細(xì)胞培養(yǎng)容器（如培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿）中加入適量的培養(yǎng)基，其量要能夠保證細(xì)胞在接種后有足夠的營養(yǎng)環(huán)境。
  2. 接種操作
    • 將蓋玻片平放在細(xì)胞培養(yǎng)容器底部。注意蓋玻片之間不要相互重疊，并且要確保蓋玻片表面平整。
    • 將細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)容器中，細(xì)胞會(huì)自然地附著在蓋玻片上。在培養(yǎng)過程中，隨著細(xì)胞的生長和增殖，它們會(huì)逐漸在蓋玻片上形成單層（對(duì)于貼壁細(xì)胞）或聚集（對(duì)于懸浮細(xì)胞）。
    • 定期更換培養(yǎng)基，以維持良好的細(xì)胞生長環(huán)境。一般每隔 2 - 3 天更換一次培養(yǎng)基，直到細(xì)胞生長到合適的密度，可以進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作，如免疫熒光染色、細(xì)胞固定等。
三、利用細(xì)胞接種器
  1. 準(zhǔn)備工作
    • 準(zhǔn)備好細(xì)胞懸液和經(jīng)過消毒處理的蓋玻片。同時(shí)，準(zhǔn)備好細(xì)胞接種器，這是一種專門用于將細(xì)胞均勻接種到玻片上的工具，其設(shè)計(jì)可以精確控制細(xì)胞接種的量和分布。
  2. 接種操作
    • 將蓋玻片放置在細(xì)胞接種器的位置。接種器通常有一個(gè)固定蓋玻片的裝置，以確保在接種過程中蓋玻片不會(huì)移動(dòng)。
    • 將細(xì)胞懸液加入到接種器的細(xì)胞懸液槽中。根據(jù)接種器的使用說明，調(diào)整細(xì)胞懸液的加入量和接種參數(shù)，如接種速度、接種壓力等。
    • 啟動(dòng)細(xì)胞接種器，它會(huì)將細(xì)胞懸液均勻地噴灑或涂抹在蓋玻片表面。這種方法可以得到非常均勻的細(xì)胞分布，適用于一些對(duì)細(xì)胞分布均勻性要求較高的實(shí)驗(yàn)，如高通量藥物篩選實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞接種。


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