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一、磺胺多殘留ELISA檢測(cè)試劑盒概要
磺胺類(lèi)藥物(SAs)是應(yīng)用廣泛的抗菌素,對(duì)畜禽疾病控制和治療起到重要作用。但由于磺胺類(lèi)藥物存在嚴(yán)重副作用,人體中長(zhǎng)期存在磺胺類(lèi)藥物會(huì)導(dǎo)致許多細(xì)菌對(duì)磺胺類(lèi)藥物產(chǎn)生耐藥性,且有潛在的致癌性。我國(guó)農(nóng)業(yè)部第235號(hào)文件規(guī)定其殘留xian量為100ug/kg,由于高效液相色譜等儀器分析方法樣本前處理及測(cè)定操作繁瑣和費(fèi)用高,推廣使用受到限制。
二、原理
磺胺多殘留檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)組織、血清、蜂蜜、牛奶等樣本中的磺胺類(lèi)藥物(SulfonamideS,SAS),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的磺胺類(lèi)藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗磺胺類(lèi)藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含磺胺類(lèi)藥物含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中磺胺類(lèi)藥物的殘留量。
三、適用范圍
磺胺多殘留檢測(cè)試劑盒可定性、定量檢測(cè)動(dòng)物組織(肌肉/魚(yú)/蝦)、雞蛋、飼料等樣品中磺胺甲唑(SMZ)、磺胺間二甲氧啶(SDM)磺胺間甲氧啶(SMM)磺胺喹啉(SQX)、磺胺啶(SD/SDZ)、磺胺二甲基啶(SM2) 等藥物的殘留量。
四、磺胺多殘留ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)指標(biāo)
1 試劑盒靈敏度:0.5ppb(ng/ml)
2 反應(yīng)模式:25℃,45min~15min。
3 檢測(cè)下限:
組織(高檢測(cè)限方法):0.5ppb 組織(低檢測(cè)限方法):2.5ppb 牛奶:10ppb 血清、尿液:2ppb 蜂蜜:0.5ppb
4 樣本回收率:
組織、蜂蜜:95±25% 尿樣、牛奶、血清:85±25%
五、磺胺多殘留快速檢測(cè)試劑盒組成
酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)液(6個(gè))、高標(biāo)準(zhǔn)液、酶標(biāo)記物、抗體工作液、底物液A、底物液B、終止液、濃縮洗滌液、復(fù)溶液
六、貯藏條件及保存期
儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。
酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
1 編 號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)45分鐘。
3 洗 滌:小心揭開(kāi)蓋板膜,甩去孔內(nèi)液體,每孔加350µl l工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
4 顯 色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘(若藍(lán)色過(guò)淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間)。
5 終 止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。