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一、豬偽狂犬gE抗體檢測(cè)試劑盒
通用名:豬偽狂犬病毒gE蛋白IgG抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for gE Antibodies to Porcine Pseudorabies virus (ELISA)
二、包裝規(guī)格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒
三、預(yù)期用途 偽狂犬病是由偽狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)引起的一種傳染病,導(dǎo)致懷孕母豬流產(chǎn)死胎、種豬不育、仔豬發(fā)病死亡等綜合癥候群。該病免疫預(yù)防用的疫苗為gE基因缺失疫苗(也有聯(lián)用gI、TK基因缺失),因此檢測(cè)gE蛋白的抗體可作為野毒感染的指標(biāo)。
豬偽狂犬gE抗體檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)豬血清中抗偽狂犬病毒gE蛋白的抗體,區(qū)別臨床野毒感染豬和用gE基因缺失疫苗免疫的豬。
四、豬偽狂犬gE抗體檢測(cè)試劑盒原理
豬偽狂犬gE抗體檢測(cè)試劑盒系由預(yù)包被豬偽狂犬病毒重組gE蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)豬血清、血漿樣本中豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體。
五、豬偽狂犬gE抗體試劑盒組成
酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照
六、儲(chǔ)存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期為12個(gè)月。
包被板開封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl;樣品孔每孔加入樣品稀釋液90μl,再加入稀釋后的血清10μl。
注:樣本稀釋比例相當(dāng)于1:100。
4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值(A值)。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陰性對(duì)照≤0.10,陽(yáng)性對(duì)照≥0.6。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.樣品A值≥0.38為陽(yáng)性;樣品A值在0.2到0.38之間為可疑;樣品A值<0.2為陰性。
2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性表明該豬可能有野毒感染,或是用非gE基因缺失疫苗免疫的。
【試驗(yàn)方法的局限性】
本檢測(cè)結(jié)果僅供篩查,不作為確診依據(jù)。