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一、禽流感H7亞型病毒抗體檢測試劑盒
通用名:禽流感H7亞型病毒抗體試劑盒
英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza Virus (Blocking ELISA )
二、包裝規(guī)格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒
三、預(yù)期用途
禽流感又名真性雞瘟或歐洲雞瘟,是由A型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)引起的禽類的一種急性、高度致死性傳染病,以急性敗血性死亡到無癥狀帶毒為特征。
用于檢測雞、鴨、鵝等禽類血清、血漿或蛋黃中禽流感H7病毒抗體,可用于免疫效果評(píng)價(jià)、輔助診斷等。
四、試劑盒原理
試劑盒系由預(yù)包被禽流感H7亞型病毒抗原的酶標(biāo)板、抗體工作液、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用競爭酶聯(lián)免疫法原理檢測禽類血清、血漿或蛋黃中A型禽流感病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入稀釋的待檢樣本和抗體工作液,若樣品中含有禽流感病毒抗體則將阻斷抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色;反之則出現(xiàn)顯色;顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有禽流感H7亞型病毒抗體。
五、禽流感H7亞型病毒抗體檢測試劑盒組成
酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照
六、儲(chǔ)存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期為12個(gè)月。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【樣品準(zhǔn)備】
1.血清/血漿:取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清或血漿,要求血清/血漿清亮,無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
蛋黃:取2ml新鮮蛋黃加2ml生理鹽水震蕩混勻,3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘,取上清作為樣本。
2.待檢血清、血漿或已處理蛋黃樣本恢復(fù)室溫、混勻待用。陰、陽性對(duì)照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性/陽性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照50μl;樣品孔每孔先加入40μl工作洗滌液,再加入10μl待檢樣本。
4.每孔加抗體工作液50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)15分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陰性對(duì)照吸光值≥1.0,陽性對(duì)照吸光值≤陰性對(duì)照吸光值×50%。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.PI(阻斷率)=(1- )×100%。
2.未曾免疫雞群:PI≥50%為陽性;PI<50%為陰性。
3.免疫雞群:監(jiān)測并記錄樣本當(dāng)時(shí)的抗體水平,根據(jù)結(jié)果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動(dòng)向。