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一、羊小反芻獸疫病毒抗體ELISA檢測試劑盒
通用名:羊小反芻獸疫病毒抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Goat Peste des Petits Ruminants Virus (ELISA)
二、包裝規(guī)格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒
三、預期用途
小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒(Peste des Petits Ruminants Virus,PPRV)引起的一種急性接觸性傳染病,其特征為口腔、舌粘膜糜爛、流淚、流鼻液。本病的易感動物為山羊,也可感染綿羊、白尾鹿等,但對牛無感染性。
用于檢測羊血清中小反芻獸疫病毒抗體,可用于小反芻獸疫疫苗免疫效果評價。
四、試劑盒原理
羊小反芻獸疫病毒抗體ELISA檢測試劑盒系由預包被小反芻獸疫病毒重組抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測羊血清、血漿樣本中小反芻獸疫病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經溫育后若樣品中含有小反芻獸疫病毒抗體,則將與酶標板上抗原結合,經洗滌除去未結合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產物變?yōu)辄S色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有小反芻獸疫病毒抗體。
五、羊小反芻獸疫病毒抗體試劑盒組成
酶標板、酶標記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照
六、儲存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期為12個月。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個月。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
2.待檢血清樣本恢復室溫、混勻待用。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條,設陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl;樣品孔每孔先加入40μl工作洗滌液,再加入10μl血清樣本。
4.每孔加抗體工作液50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應30分鐘。
5.甩去孔內液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應15分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
【參考值】實驗正常的情況下,陰性對照吸光值≥1.0,陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。
【檢驗結果的解釋】
1. PI(阻斷率)=(1- )×100%,PI≥50%為陽性;PI<50%為陰性。
2.本實驗結果為陰性表明羊只抗體水平不足,建議補打相應疫苗。