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訪問次數(shù):275更新時間:2023-06-10 17:22:49
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一、羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測試劑盒
通用名:羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Alpha-Toxin gene of Clostridium Perfringens(ELISA)
二、包裝規(guī)格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒
三、預(yù)期用途
羊產(chǎn)氣莢膜梭菌病是由產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium Perfringens)引起的,該菌是動物生存環(huán)境中常見的一種梭菌, 它能分解有機質(zhì)中的糖, 并產(chǎn)生大量氣體和毒素, 導(dǎo)致動物機體組織壞死、中毒甚至死亡。感染羊后可引起羔羊痢疾、羊猝疽、腸毒血癥等疾病,嚴重危害養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展。
羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測試劑盒用于檢測羊血清中產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體,可用于羊三聯(lián)四防疫苗免疫效果評價。
四、試劑盒原理
試劑盒由預(yù)包被產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素蛋白抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測羊血清、血漿樣本中α毒素抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有α毒素抗體,則將與酶標板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶標結(jié)合物反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體。
五、試劑盒組成
酶標板、酶標記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照、終止液、稀釋板、蓋板膜
六、儲存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期為12個月。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個月。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋(如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標板條,設(shè)陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
注:樣本稀釋比例相當(dāng)于1:50。
4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應(yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
【參考值】 實驗正常的情況下,陰性對照的平均OD值即ODNC應(yīng)≤0.3,陽性對照的平均OD值即ODPC應(yīng)≥0.6。