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一、羊痘病毒抗體ELISA檢測試劑盒
通用名:羊痘病毒抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Capripox virus(ELISA)
二、包裝規(guī)格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒
三、預期用途
羊痘是由羊痘病毒引起的一種人畜共患病,以體溫升高,皮膚出現(xiàn)痘疹為主要特征。
羊痘病毒抗體檢測試劑盒用于檢測羊血清中羊痘抗體,可用于羊痘疫苗免疫效果評價或該病的輔助診斷。
四、羊痘病毒抗體ELISA檢測試劑盒原理
試劑盒由預包被羊痘核蛋白抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測羊血清樣本中羊痘抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經溫育后若樣品中含有羊痘抗體,則將與酶標板上抗原結合,經洗滌除去未結合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶標結合物反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中抗體含的特異性量成正相關;加入終止液終止反應后,產物變?yōu)辄S色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有羊痘抗體。
五、試劑盒組成
酶標板、酶標記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照、終止液、稀釋板、蓋板膜
六、儲存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期為12個月。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清先按10倍稀釋(如在稀釋板中加入90μl樣品稀釋液再加10μl血清,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條,設陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入樣品稀釋液90μl,再加入稀釋后的血清10μl。
注:樣本稀釋比例相當于1:100。
4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應30分鐘。
5.甩去孔內液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
【參考值】 實驗正常的情況下,陰性對照≤0.2,陽性對照≥0.6。