ATP發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒

MCE 國(guó)際站：Cell-ATP Viability Detection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件： -20°C，一年避光保存

簡(jiǎn)介：MCE ATP 發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒基于高靈敏度生物發(fā)光檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)對(duì) ATP 進(jìn)行定量以測(cè)定培養(yǎng)物中活細(xì)胞數(shù)目及細(xì)胞活力。

概述：MCE ATP 發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒基于高靈敏度生物發(fā)光檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)對(duì) ATP 進(jìn)行定量以測(cè)定培養(yǎng)物中活細(xì)胞數(shù)目及細(xì)胞活力。ATP 是細(xì)胞新陳代謝的一個(gè)重要指標(biāo)，其與活細(xì)胞數(shù)目呈良好的線性關(guān)系，是細(xì)胞活力檢測(cè)的重要標(biāo)志性分子。ATP 生物發(fā)光技術(shù)的原理為：熒光素酶以熒光素、三磷酸腺苷 (ATP) 和 O2 為底物，在 Mg2+ 存在時(shí)，可將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能；在熒光素酶催化的發(fā)光反應(yīng)中，ATP 在一定的濃度范圍內(nèi)，其濃度與發(fā)光強(qiáng)度呈線性關(guān)系，即在光信號(hào)與酶反應(yīng)體系中，發(fā)光值與 ATP 呈正比，ATP 與活細(xì)胞數(shù)成正比?；诖?，ATP 法便可通過(guò) ATP 含量來(lái)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)或活力測(cè)定，且不受化合物自發(fā)熒光的影響。使用時(shí)，只需將本試劑等體積添加至培養(yǎng)細(xì)胞中即可進(jìn)行檢測(cè)，均質(zhì)檢測(cè)方案避免了同類檢測(cè)產(chǎn)品使用時(shí)的細(xì)胞洗滌、培養(yǎng)基去除及多步加樣等操作，簡(jiǎn)便快捷，減少操作誤差。與常用的 MTT、CCK8 法相比，ATP 法具有反應(yīng)更迅速、靈敏度更高、線性范圍更廣、信號(hào)更穩(wěn)定及便捷高效等優(yōu)點(diǎn)。本品與常用的細(xì)胞培養(yǎng)基兼容，如 RPMI1640、MEM、DMEM 和 Ham's F12，也不受酚紅和有機(jī)溶劑的影響，誤差小，準(zhǔn)確率高，且適用于自動(dòng)化高通量篩選，為細(xì)胞增殖與毒性分析提供了更加高效、便捷的解決方案。

描述：

ATP是細(xì)胞代謝的重要指標(biāo)，與活細(xì)胞數(shù)量呈良好的線性關(guān)系。ATP生物發(fā)光技術(shù)原理為：熒光素酶以熒光素、三磷酸腺苷（ATP）和O₂為底物，在Mg²⁺存在下將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能。在Luciflucase催化的發(fā)光反應(yīng)中，在一定濃度范圍內(nèi)，ATP濃度與發(fā)光強(qiáng)度呈線性關(guān)系，ATP的量與細(xì)胞數(shù)量成正比?；诖?，Cell-ATP活力檢測(cè)試劑盒可用于細(xì)胞計(jì)數(shù)或通過(guò)ATP含量測(cè)定活力。

MCE Cell-ATP活力檢測(cè)試劑盒是基于高靈敏度的ATP生物發(fā)光檢測(cè)技術(shù)，用于檢測(cè)培養(yǎng)中的活細(xì)胞數(shù)量和活力。

操作說(shuō)明：熒光素酶的活性對(duì)溫度較為敏感，故在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，應(yīng)先將本試劑與細(xì)胞平衡至室溫后再進(jìn)行測(cè)定。多次使用時(shí)，建議將本產(chǎn)品適當(dāng)分裝凍存。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇適用于化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的孔板用于本實(shí)驗(yàn) (如適合細(xì)胞培養(yǎng)的白色或黑色多孔板)，以下以 96 孔板舉例。1. 細(xì)胞準(zhǔn)備接種細(xì)胞：在 96 孔板中每孔接種 100 μL 細(xì)胞，確保每孔細(xì)胞數(shù)量在 5 × 104 以內(nèi)。設(shè)置不含細(xì)胞的培養(yǎng)液孔作為陰性對(duì)照，按照培養(yǎng)細(xì)胞的常規(guī)方法進(jìn)行培養(yǎng)。注：a) 接種細(xì)胞數(shù)目因檢測(cè)所用孔板不同存在差異，如用 384 孔板，每孔接種 25 μL 細(xì)胞，確保每孔細(xì)胞數(shù)量在 1 × 104 以內(nèi)。b) 可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，如：加入藥物處理細(xì)胞，應(yīng)注意設(shè)置對(duì)照。若待測(cè)藥物的溶劑含量較高，熒光素酶反應(yīng)可能會(huì)被干擾，致化學(xué)發(fā)光信號(hào)受到影響，可設(shè)置含有溶劑的細(xì)胞培養(yǎng)液的對(duì)照孔以排除此干擾。c) 建議設(shè)置細(xì)胞濃度梯度，以確定 ATP 檢測(cè)的條件。2. 檢測(cè)試劑的準(zhǔn)備按照 96 孔板每孔 100 μL 的Cell-ATP Viability Detection Reagent 的量 (384 孔板每孔 25 μL 的 Cell-ATP Viability Detection Reagent 的量)，即V細(xì)胞：VCell-ATP Reagent= 1:1)，取適量本產(chǎn)品，解凍后平衡至室溫。3. 細(xì)胞活力檢測(cè)1) 取出細(xì)胞培養(yǎng)板，室溫平衡 10 min。注：室溫平衡通常不建議超過(guò) 30 min。2) 向 96 孔板的每孔加入 100 μL Cell-ATP Viability Detection Reagent (384 孔板每孔加入 25 μL Cell-ATP Viability Detection Reagent) 。3) 室溫振蕩混勻 2 min，以促進(jìn)細(xì)胞充分裂解。4) 室溫孵育 10 min，使發(fā)光信號(hào)趨于穩(wěn)定。5) 使用具有檢測(cè)化學(xué)發(fā)光功能的多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行化學(xué)發(fā)光測(cè)定，每個(gè)孔的檢測(cè)時(shí)間一般為 0.25-1 s。注：具體參數(shù)可根據(jù)儀器類型及檢測(cè)靈敏度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。6) 根據(jù)化學(xué)發(fā)光讀數(shù)直接計(jì)算細(xì)胞的相對(duì)活力，或根據(jù) ATP 標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出 ATP 的量以計(jì)算出細(xì)胞的相對(duì)活力。注：檢測(cè)效果可能會(huì)因細(xì)胞種類及生長(zhǎng)狀態(tài)不同而有所差異，對(duì)于一些 ATP 含量特別高的細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞數(shù)量至 5 × 104 后可能不會(huì)再呈現(xiàn)明顯的線性關(guān)系，但化學(xué)發(fā)光讀數(shù)還是會(huì)繼續(xù)升高。

注意事項(xiàng)：1. 本產(chǎn)品中含有熒光素酶，其活性對(duì)溫度較為敏感，反復(fù)凍融會(huì)致其逐漸失活，建議分裝凍存，避免反復(fù)凍融。2. 本產(chǎn)品避免室溫保存，如需多次使用，建議將試劑分裝后凍存，分裝所用耗材應(yīng)避免 ATP 污染。3. 反復(fù)凍融時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致試劑中出現(xiàn)少量沉淀，可平衡至室溫后觀測(cè)沉淀溶解情況，如仍有殘留，可離心后去除。4. 若待測(cè)藥物的溶劑含量較高，熒光素酶反應(yīng)可能會(huì)被干擾，致化學(xué)發(fā)光信號(hào)受到影響，可設(shè)置含有溶劑的細(xì)胞培養(yǎng)液的對(duì)照孔以排除此干擾。5. 檢測(cè)時(shí)需使用適合于細(xì)胞培養(yǎng)的白色或黑色的多孔板 (96 孔板或 384 孔板)，普通透明多孔板的相鄰孔之間可能會(huì)產(chǎn)生相互干擾。6. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。7. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

銷售產(chǎn)品：FL118  | Teduglutide  | Brigatinib  | Salvianolic acid B  | Harringtonine  | Ganglioside GM3  | Rifampicin  | Sulfo-NHS-SS-Biotin (sodium)  | Tetrahydrobiopterin  | CART(55-102)(human)

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