NP-40 裂解液

MCE 國際站：NP-40 Lysis Buffer

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件： -20oC，1 年

簡介：MCE NP-40 Lysis Buffer 是一種比較溫和的細(xì)胞/組織裂解液，可用于動(dòng)物、植物的細(xì)胞或組織及真菌、細(xì)菌樣品，經(jīng)裂解得到的蛋白樣品可用于 PAGE、Western、IP、co-IP 和 ELISA 等實(shí)驗(yàn)。

概述：NP-40 Lysis Buffer 是一種比較溫和的細(xì)胞/組織裂解液，可用于動(dòng)物、植物的細(xì)胞或組織及真菌、細(xì)菌樣品，經(jīng)裂解得到的蛋白樣品可用于 PAGE、WB、IP、Co-IP 和 ELISA 等相關(guān)實(shí)驗(yàn)。溫和的裂解方法有利于維持原有的蛋白結(jié)構(gòu)及蛋白間的相互作用。本產(chǎn)品的主要成分為 50 mM Tris (pH 7.4)、150 mM NaCl、1% NP-40 及 sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA、leupeptin 等，可有效防止蛋白降解。

描述：

MCE NP-40裂解液是一種比較溫和的裂解液，可用于動(dòng)植物細(xì)胞或組織，也可用于真菌、細(xì)菌樣品，裂解得到的蛋白樣品可用于PAGE、WB、IP、Co-IP、ELISA等實(shí)驗(yàn)等，溫和的裂解有利于保持蛋白原有的結(jié)構(gòu)和原有的蛋白間相互作用。

NP-40裂解液含有50 mM Tris（pH 7.4）、150 mM NaCl、1% NP-40以及多種抑制劑如焦磷酸鈉、β-甘油磷酸鹽、釩酸鈉、氟化鈉、EDTA和亮抑酶肽等，能有效抑制蛋白降解。

操作說明：使用前需將本產(chǎn)品在室溫下充分融解并混勻，置于冰上備用。取適當(dāng)量的裂解液，如有需要，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶/磷酸酶/蛋白激酶等相關(guān)抑制劑 Cocktail (相關(guān)產(chǎn)品見附件清單)，具體操作可參考相關(guān)產(chǎn)品說明書。1. 對于細(xì)胞樣品貼壁細(xì)胞1) 去除培養(yǎng)液，用預(yù)冷的 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液清洗 1 次 (洗去血清中 IgG 干擾對 IP 和 Co-IP 實(shí)驗(yàn)是有益的，但對 WB 可能并非必要；若血清中的蛋白沒有干擾，可不清洗)。2) 按照 6 孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入預(yù)冷的 NP-40 Lysis Buffer，用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。注：通常裂解液接觸動(dòng)物細(xì)胞 1-2 s 后，細(xì)胞就會被裂解。植物細(xì)胞宜在冰上裂解 2-10 min。3) 充分裂解后，10,000-14,000 g 離心 3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、WB 和 IP、Co-IP 等相關(guān)實(shí)驗(yàn)。懸浮細(xì)胞1) 離心收集細(xì)胞，500 g，5 min，棄上清 (也可用預(yù)冷的 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗 1 遍后再進(jìn)行離心，棄上清)。輕輕渦旋或輕彈管底使細(xì)胞盡量分散開。2) 按照 6 孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入預(yù)冷的 NP-40 Lysis Buffer，輕彈管底以充分裂解細(xì)胞，此時(shí)應(yīng)無明顯的細(xì)胞沉淀。注：若細(xì)胞量較多，建議將樣品分裝后裂解 (0.5-5 × 106 cells/管)。3) 充分裂解后，10,000-14,000 g 離心 3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、WB 和 IP、Co-IP 等相關(guān)實(shí)驗(yàn)。細(xì)菌或酵母細(xì)胞為達(dá)到更好的裂解效果，細(xì)菌和酵母可先分別使用溶菌酶和破壁酶進(jìn)行消化，然后再使用 NP-40 Lysis Buffer 進(jìn)行裂解。1) 取 1 mL 菌液或酵母液，離心去上清 (也可用預(yù)冷的 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗 1 遍后再進(jìn)行離心，棄上清)。輕輕渦旋或輕彈管底以把細(xì)菌或酵母細(xì)胞盡量分散開。2) 加入 100-200 μL NP-40 Lysis Buffer，輕彈管底以充分裂解細(xì)胞，冰上裂解 2-10 min。3) 充分裂解后，10,000-14,000 g 離心 3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、WB 和 IP、Co-IP 等相關(guān)實(shí)驗(yàn)。2. 對于組織樣品1) 將組織置于小皿中，冰上操作，剪切成細(xì)小的碎片。注：也可將組織樣品冷凍后使用液氮充分研磨后再加入 NP-40 Lysis Buffer 進(jìn)行裂解。2) 按照每 20 mg 組織加入 150-250 μL 裂解液的比例加入預(yù)冷的 NP-40 Lysis Buffer。若裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液的用量；若需高濃度的蛋白樣品，可適當(dāng)減少裂解液的用量3) 使用玻璃勻漿器勻漿。4) 充分裂解后，10,000-14,000 g 離心 3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、WB 和 IP、Co-IP 等實(shí)驗(yàn)。注：a) 蛋白濃度因不同狀態(tài)的不同組織會有所不同。本實(shí)驗(yàn)中，每 20 mg 凍存的小鼠肝臟組織用 200 μL NP-40 Lysis Buffer 裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為 15-25 mg/mL。b) 若組織樣品本身體積較小，可適當(dāng)剪切后直接加入 NP-40 Lysis Buffer 進(jìn)行裂解，經(jīng)短暫渦旋后使樣品充分裂解，離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：1. 本產(chǎn)品盡量避免反復(fù)凍融，可適當(dāng)分裝后凍存使用。2 . 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4oC 進(jìn)行。3 . 該試劑盒中不包含蛋白酶/磷酸酶/蛋白激酶等相關(guān)抑制劑 Cocktail。4. 裂解液用量說明：不同細(xì)胞的裂解液用量不同。通常 6 孔板每孔細(xì)胞或 1 mL 菌液/酵母液加入 150 μL 裂解液即可。若細(xì)胞密度較高，可適當(dāng)增加裂解液用量至 200-250 μL。通常，每 1 × 106 個(gè)動(dòng)物細(xì)胞用 100 μL NP-40 Lysis Buffer 裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為 2-4 mg/mL。5. 關(guān)于裂解液的選擇，建議通過預(yù)實(shí)驗(yàn)以摸索最佳裂解條件并裂解產(chǎn)品。如：對于一些特殊蛋白的 IP，若 WB 及 IP 中細(xì)胞裂解液裂解效果不太理想，可嘗試使用 RIPA 裂解液 (強(qiáng)、中或弱) 或 NP-40 Lysis Buffer。若 IP 的背景很高，即非特異的蛋白也被 IP 下來，或?qū)τ谝恍┹^難溶解蛋白的 WB，則需選用裂解強(qiáng)度較高的裂解液，如 RIPA 裂解液 (強(qiáng))。若目的蛋白未被 IP 下來，則可能是裂解強(qiáng)度過強(qiáng)，可使用較為溫和的裂解液如 MCE NP-40 Lysis Buffer。6. 本產(chǎn)品含有較高濃度的去垢劑，后續(xù)蛋白濃度測定不宜用 Bradford 法，建議使用 BCA 法進(jìn)行測定。7. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。8. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品：Rilmazafone hydrochloride  | Aristolochic acid A  | 116-9e  | 5-Methyltetrahydrofolic acid  | NMS-873  | Isatuximab  | BLU9931  | Saikosaponin A  | Cilastatin  | BRD0705

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