雙熒光素酶試劑盒

MCE 國(guó)際站：Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件： -20℃ 一年避光保存，避免反復(fù)凍融

簡(jiǎn)介：MCE Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit 含有高純度的 D-熒光素、腔腸素以及比例優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，實(shí)現(xiàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。

概述：雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)包括螢火蟲(chóng)熒光素酶 (Firefly Luciferase，firLuc)和海腎熒光素酶 (Renilla Luciferase，rLuc)。在ATP和熒光素酶存在下，D-熒光素 (D-Luciferin)能夠被氧化，發(fā)出波長(zhǎng)為 570 nm 左右的生物螢光 (bioluminescence) (圖1)。當(dāng)熒光素過(guò)量時(shí)，發(fā)光亮度與熒光素酶濃度呈正相關(guān)，廣泛用于熒光素酶報(bào)告基因的檢測(cè)。在 O2 存在條件下，海腎熒光素酶 (Renilla Luciferase)可以將腔腸熒光素(coelenterazine)氧化成腔腸酰胺 (coelenteramide)，并發(fā)出波長(zhǎng)為 480 nm 左右的生物螢光 (圖2)。海腎熒光素酶作為雙熒光素酶報(bào)告基因的內(nèi)參，消除了細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)、數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率等差異的影響，使得檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性更高。本試劑盒中含有高純度的D-熒光素、腔腸素以及比例優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液。在雙熒光素酶反應(yīng)中，首先用 Firefly Luciferase Working Solution (含D-熒光素)檢測(cè)螢火蟲(chóng)熒光素酶信號(hào)；隨后，直接加入 Renilla Luciferase Working Solution (含腔腸素)，將螢火蟲(chóng)熒光素酶的信號(hào)猝滅，同時(shí)產(chǎn)生海腎熒光素酶信號(hào)。本試劑盒具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快捷、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。

描述：

MCE 海腎-螢火蟲(chóng)熒光素酶雙聯(lián)檢測(cè)試劑盒含有高純度 D-熒光素、腔腸素和專(zhuān)有反應(yīng)緩沖液。首先將螢火蟲(chóng)熒光素酶工作液加入樣品中。該試劑含有可產(chǎn)生螢火蟲(chóng)熒光素酶生物發(fā)光的 D-熒光素。接下來(lái)，將海腎熒光素酶工作液加入同一樣品中。它會(huì)猝滅螢火蟲(chóng)熒光素酶生物發(fā)光并產(chǎn)生海腎熒光素酶生物發(fā)光。兩種反應(yīng)的光產(chǎn)生量均可方便地在光度計(jì)上測(cè)量。

操作說(shuō)明：1. 配制試劑1.1 Lysis Buffer (1×) 的配置將 Lysis Buffer (5×) 用超純水稀釋 5 倍，配置成 1× 工作液。1.2 螢火蟲(chóng)熒光素酶工作液 (Firefly Luciferase Working Solution)的配置將 Firefly Luciferase Substrate 干粉管短暫離心后開(kāi)蓋，加入 1 mL Firefly Luciferase Buffer 將其全部溶解并混合均勻，然后將全部溶液移入剩余的 9 mL Firefly Luciferase Buffer 中，混勻。1.3 海腎熒光素酶工作液 (Renilla Luciferase Working Solution)的配置將 Renilla Luciferase Substrate 短暫離心后開(kāi)蓋，加入 1 mL Renilla Luciferase Buffer 混合均勻，然后將全部溶液移入剩余的 9 mL Renilla Luciferase Buffer 中，混勻。注1：所有試劑使用前需平衡至室溫。注2：螢火蟲(chóng)熒光素酶、海腎熒光素酶工作液配制完成后，分裝、避光保存，避免反復(fù)凍融，-80℃可保存一年，-20℃可保存一個(gè)月。2. 裂解細(xì)胞2.1 細(xì)胞裂解時(shí)密度應(yīng)小于 95%，細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)密，易導(dǎo)致裂解不充分。質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)、病毒感染細(xì)胞后，需培養(yǎng)一段時(shí)間 (一般 48 小時(shí))使熒光素酶充分表達(dá)。2.2 去除培養(yǎng)基，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗 1 遍，注意不要將細(xì)胞吹起。2.3 加入適量的 1× Lysis Buffer，用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。2.4 將細(xì)胞培養(yǎng)板置于搖床上，室溫、輕晃孵育 15 分鐘。注：細(xì)胞數(shù)量較高時(shí)，可適當(dāng)加大裂解液用量、延長(zhǎng)裂解時(shí)間。2.5 將裂解物轉(zhuǎn)移到新的離心管中，4℃、12,000 rpm 離心 10 分鐘，取上清備用。3. 熒光檢測(cè)3.1 取 20 μL 細(xì)胞裂解物，加至 96 孔黑色不透底酶標(biāo)板中。3.2 檢測(cè)螢火蟲(chóng)熒光素酶信號(hào)取 100 μL 平衡至室溫的螢火蟲(chóng)熒光素酶工作液加至上述反應(yīng)板中，混勻后，用酶標(biāo)儀測(cè)定螢火蟲(chóng)熒光素酶信號(hào)。3.3 檢測(cè)海腎熒光素酶信號(hào)取 100 μL 平衡至室溫的海腎熒光素酶工作液加至上述反應(yīng)板中，混勻后，用酶標(biāo)儀測(cè)定海腎熒光素酶信號(hào)。3.4 結(jié)果分析在以海腎螢光素酶為內(nèi)參的情況下，用螢火蟲(chóng)螢光素酶所得發(fā)光值除以海腎螢光素酶所得發(fā)光值。根據(jù)得到的比值來(lái)比較不同樣品間目的報(bào)告基因的激活程度。注：為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性，螢火蟲(chóng)熒光素酶 (fLuc) 和海腎熒光素酶 (rLuc) 的發(fā)光值均應(yīng)為相對(duì)發(fā)光值 (RLU, relative light unit)。

注意事項(xiàng)：1. Luminometer 發(fā)光計(jì)或者多功能酶標(biāo)儀或者其他能夠檢測(cè)生物發(fā)光的儀器均適用于此試劑盒。2. 螢火蟲(chóng)熒光素酶、海腎熒光素酶工作液配制完成后，分裝、避光保存，避免反復(fù)凍融，-80℃ 可保存一年，-20℃ 可保存一個(gè)月。3. 發(fā)光強(qiáng)度以及衰減速率取決于熒光素酶的反應(yīng)速率。溫度對(duì)酶反應(yīng)速率有直接影響，兩種螢光素酶活性的最適溫度約為室溫 (20-25℃)，檢測(cè)時(shí)請(qǐng)將樣品與反應(yīng)試劑平衡至室溫。4. 本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

銷(xiāo)售產(chǎn)品：Dehydrocorydaline (chloride)  | (20R)-Ginsenoside Rg3  | Maribavir  | Pirarubicin  | Xanthurenic acid  | Serplulimab  | Fingolimod  | LCL521 dihydrochloride  | Rivaroxaban  | BML-284

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