蛋白轉(zhuǎn)染試劑
MCE 國際站:Protein Transfection Reagent
品牌:MedChemExpress (MCE)
存儲條件:20°C,1 年避免反復凍融
簡介:MCE Protein Transfection Reagent 是一種用于轉(zhuǎn)染蛋白質(zhì)、抗體以及多肽的陽離子高分子聚合物,可將蛋白直接遞送到細胞內(nèi)。
概述:MCE Protein Transfection Reagent 是一種用于轉(zhuǎn)染蛋白質(zhì)、抗體以及多肽的陽離子高分子聚合物,可將蛋白直接遞送到細胞內(nèi)。陽離子高分子轉(zhuǎn)染試劑與蛋白質(zhì)通過靜電、疏水及氫鍵等非共價相互作用形成的帶正電復合物,附著在帶負電荷的細胞表面,通過質(zhì)膜融合或內(nèi)吞作用進入細胞,與核內(nèi)體結(jié)合后將蛋白釋放在細胞質(zhì)中,從而實現(xiàn)蛋白質(zhì)的細胞轉(zhuǎn)染。MCE Protein Transfection Reagent 具有如下優(yōu)點:· 轉(zhuǎn)染效率高:轉(zhuǎn)染后 3-12 小時即可進行檢測。對原代細胞和難以轉(zhuǎn)染的細胞也有很高的轉(zhuǎn)染效率· 蛋白活性高:與蛋白非共價結(jié)合,遞送后的蛋白仍具有較高的生物活性· 適用范圍廣:適用于多種細胞類型,可與蛋白、肽和熒光標記抗體一起使用· 細胞毒性低:作用溫和,生物相容性好· 操作簡便:實驗簡單快速,無需分離、克隆和轉(zhuǎn)染基因序列
描述:
MCE 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子脂質(zhì)混合物,可與蛋白質(zhì)、肽、抗體和其他生物活性分子復合,從而實現(xiàn)它們直接的細胞內(nèi)遞送。試劑蛋白復合物附著在帶負電荷的細胞表面,要么直接與膜融合,將捕獲的蛋白質(zhì)運送到細胞內(nèi),要么被細胞內(nèi)吞,然后與內(nèi)體融合,將捕獲的蛋白質(zhì)釋放到細胞質(zhì)中。
MCE 蛋白轉(zhuǎn)染試劑的特點
快速蛋白質(zhì)遞送:孵育后 3 至 12 小時內(nèi)最佳遞送,對原代細胞和難轉(zhuǎn)染細胞具有高轉(zhuǎn)染效率。
高蛋白質(zhì)活性:遞送復合物是非共價的,使蛋白質(zhì)和多肽在遞送后保留生物活性。
多功能性:適用于多種細胞,可與蛋白質(zhì)、多肽和熒光標記抗體一起使用。
低細胞毒性:作用溫和,生物相容性好
省時:無需分離、克隆和轉(zhuǎn)染基因序列。
操作說明:1.準備待轉(zhuǎn)染細胞(1)貼壁細胞:轉(zhuǎn)染前一天,將消化后的細胞按照每孔 1-3 × 105 個細胞進行鋪板,確保轉(zhuǎn)染時密度為 50%-100%。(2)懸浮細胞:轉(zhuǎn)染當天,配制轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復合物之前,先進行細胞鋪板,每 500 μL 生長培養(yǎng)基中加入 2-6 × 105 個細胞。注:為提高轉(zhuǎn)染效率,建議使用生長狀態(tài)良好且生長處于指數(shù)期、存活率 > 90% 的細胞進行轉(zhuǎn)染。2.準備轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復合物(1)取 1-10 μg 蛋白加入到 1.5 mL 離心管中,加入 1-3 μL MCE Protein Transfection Reagent,輕柔混合均勻,室溫靜置孵育 3 min。注:蛋白質(zhì)實際用量需根據(jù)蛋白種類及實驗類型進行優(yōu)化。最佳轉(zhuǎn)染條件因細胞類型和培養(yǎng)條件不同而有所區(qū)別(如熒光蛋白 GFP 建議用量 5-10 μg,熒光蛋白 Phycoerythrin 建議用量 0.5-2 μg,凋亡蛋白 Saporin 建議用量 0.1-1 μg),可做預實驗摸索蛋白最佳用量。轉(zhuǎn)染試劑的體積應根據(jù)蛋白濃度和培養(yǎng)皿的大小進行調(diào)整注:細胞轉(zhuǎn)染時,可根據(jù)實際情況參考上表進行等倍放大。(2)加 100 μL 無血清培養(yǎng)基 1,輕柔混勻,室溫靜置孵育 20 min,即為轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復合物。(3)加 400 μL 無血清培養(yǎng)基 2稀釋轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復合物,輕柔混勻。3.細胞轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復合物孵育期間,棄去細胞培養(yǎng)基,用 37°C 預熱的無血清培養(yǎng)基或 1 × PBS 洗滌 2-3 次。將轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復合物 (500 μL) 輕輕滴加到每孔細胞中,輕柔混勻,培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。4.分析轉(zhuǎn)染效率培養(yǎng) 3-12 h 后,可根據(jù)實驗需要選用熒光檢測法、Western Blot、ELISA、RT-PCR、流式細胞術(shù)、報告基因、免疫熒光染色等方案檢測分析轉(zhuǎn)染效果。注:培養(yǎng) 3 h 后補充轉(zhuǎn)染液或棄去轉(zhuǎn)染液用培養(yǎng)基替代(可選);再檢測或可視化之前,可先用 37°C 預熱的無血清培養(yǎng)基或 PBS 洗滌細胞 3-4 次,去除可能影響檢測結(jié)果的未轉(zhuǎn)染蛋白。
注意事項:1.為了獲得較高的轉(zhuǎn)染效率,建議選用高純度、高活性的蛋白。2.細胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率,建議使用生長狀態(tài)良好且生長處于指數(shù)期、存活率 > 90% 的細胞進行蛋白轉(zhuǎn)染。3.血清會對轉(zhuǎn)染效果產(chǎn)生一定程度的干擾,為提高轉(zhuǎn)染效率,轉(zhuǎn)染過程中,建議使用無血清培養(yǎng)基。4.細胞暴露在轉(zhuǎn)染混合物中的時間長度將影響轉(zhuǎn)染效率。最佳的蛋白質(zhì)遞送時間需要摸索確定。一般情況下,肽和小分子蛋白在 2 h 左右進入細胞,大多數(shù)酶和中等大小的蛋白質(zhì)在 3-3.5 h 轉(zhuǎn)移到細胞中,大分子蛋白質(zhì)、抗體或多聚體蛋白可能需要 5 h 或更長時間才能有效遞送。5.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。6.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
銷售產(chǎn)品:Dobutamine (hydrochloride) | Ranitidine (hydrochloride) | 20-Deoxyingenol | Eplerenone | Sabutoclax | Sofosbuvir | Stafib-1 | Lomustine | CCMI | Cleistanthin B
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