Reverse Transcriptase

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品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件： -20°C，1 年

簡介：Reverse Transcriptase是通過基因重組技術(shù)克隆表達(dá)M-MuLV的缺失突變型RNase H-的反轉(zhuǎn)錄酶。

概述：Reverse Transcriptase是通過基因重組技術(shù)克隆表達(dá)M-MuLV的缺失突變型RNase H-的反轉(zhuǎn)錄酶。一般的野生型M-MuLV(Moloney Murine Leukemia Virus)具有以下幾種活性：1)依賴于RNA的DNA聚合酶活性；2)依賴于DNA的DNA聚合酶活性；3)RNase H活性。由于RNase H能夠催化降解DNA/RNA雜合體中的RNA，因此在cDNA第一條鏈的合成反應(yīng)中可能會降解RNA/DNA雜合體中的模板RNA。本酶的RNase H活性缺失，延伸能力強(qiáng)，可用于較長的cDNA合成，高比例的全長cDNA文庫的構(gòu)建以及Real Time RT-PCR反應(yīng)等。

描述：

該酶缺乏RNase H活性，延伸能力強(qiáng)，可用于較長cDNA合成、高比例全長cDNA文庫構(gòu)建、Real Time RT-PCR反應(yīng)等。

操作說明：cDNA第一鏈合成反應(yīng)體系1) 試劑融化后，將試劑盒中各組分混勻并稍微離心后置于冰上。2) 按順序加入以下反應(yīng)物：3) 如果RNA模板GC含量高或者含有二級結(jié)構(gòu)，可先將RNA模板和Water(RNase-Free)混勻后，65℃孵育5min，冰上冷卻，再加入其它組分。4) 3) 輕輕混勻，離心。42℃孵育15-30min。如果RNA模板中不含poly A結(jié)構(gòu)，25℃先孵育5min，隨后42℃孵育15-30min。反應(yīng)產(chǎn)物可直接用于PCR，如果不立即使用，-20℃保存少于一周，長時間保存建議-70℃放置。注意：有實驗結(jié)果提示，本反轉(zhuǎn)錄酶可在15min內(nèi)完成1kb反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

注意事項：1. 用DEPC處理實驗用到的所有實驗器材，或者購買已經(jīng)證明無核酸酶的實驗用具，實驗過程戴手套并經(jīng)常更換手套，避免RNA酶的污染。2. 確保所用試劑及超純水中無RNA酶污染。3. 純化過的RNA必須保證不含有鹽，金屬離子，乙醇和苯酚，以上成分會干擾第 鏈cDNA的合成反應(yīng)?？刹捎靡掖汲恋鞷NA的方法去除掉痕量污染物。4. 為保證反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的有效進(jìn)行，需使用高質(zhì)量的RNA模板。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴 次性手套操作。

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