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Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒

MCE 國際站：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-K1073

中文名稱：Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒

存儲條件：-20°C，1年避光保存，避免反復凍融

產品活性：MCE Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒可方便、快捷的檢測細胞凋亡。經 Annexin V-FITC 和 PI 聯合染色后，正常細胞基本無熒光（Annexin V-/PI-），早期凋亡細胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細胞及壞死細胞則呈綠色和紅色熒光（Annexin V+/PI+）。

生物活性：MCE Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒采用 FITC 標記的重組人Annexin V 檢測細胞凋亡。在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸 (PS) 位于細胞膜內側；細胞凋亡早期， PS 會外翻到細胞膜外側。 Annexin V （膜聯蛋白 V）是一種 Ca2+ 依賴性磷脂結合蛋白，可與 PS 特異性結合，因此Annexin V 常作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。Annexin V 經 FITC 標記后可發(fā)綠色熒光，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。此外，本試劑盒中的碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）染色液是一種不能穿透細胞膜的紅色熒光染料，可對凋亡晚期細胞及壞死細胞染色。經 Annexin V-FITC 和 PI 聯合染色后，正常細胞基本無熒光（Annexin V-/PI-）早期凋亡細胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細胞及壞死細胞則呈綠色和紅色熒光（Annexin V+/PI+）。

操作流程：細胞與 Annexin V-FITC 和 PI 孵育 1. 收集細胞：收集 1-5 × 105 個細胞。 懸浮細胞：1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細胞沉淀。 貼壁細胞：小心吸取細胞培養(yǎng)液保存?zhèn)溆?。加?PBS 洗滌后，加入適量胰酶消化液（盡量不含 EDTA，以免影響 Annexin V 和 PS 的結合）消化細胞。加入前面收集的培養(yǎng)液，輕輕吹打細胞，制成單細胞懸液，1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細胞沉淀。 注：建議胰酶消化液不含 EDTA。 2. 加入 195 μL Binding Buffer，輕輕重懸細胞。 3. 加入 5 μL Annexin V-FITC，輕輕混勻。 4. 加入 10 μL PI Stain，輕輕混勻。 5. 室溫下避光孵育 10-20 min。 注：孵育過程中可輕輕顛倒數次以加強染色效果。 6. 檢測與分析 6.1 流式細胞儀檢測：用流式細胞儀檢測熒光強度。 注： a. 流式檢測時，Annexin V-FITC 最大激發(fā)波長為 488 nm，最大發(fā)射波長為 525 nm，在 FL1 通道檢測；PI-DNA 最大激發(fā)波長為 535 nm，最大發(fā)射波長為 617 nm，在 FL2 或FL3 通道檢測。 b. 建議設置三組對照：未染色組、PI 單染組及 Annexin V-FITC 單染組。 6.2 熒光顯微鏡檢測：1000 g 離心 5 min，棄去上清，加入 50-100 μL Binding Buffer 輕輕重懸細胞沉淀，涂片后用熒光顯微鏡檢測熒光強度。

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