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重組慢病毒的基本操作規(guī)范介紹
閱讀：306 發(fā)布時(shí)間：2023-11-8
慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對(duì)稱結(jié)構(gòu)、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細(xì)胞的類型)，再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼，里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶)。
慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，基因組為雙鏈RNA。但區(qū)別于一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒具有更廣的宿主范圍，對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力。
重組慢病毒載體是以HIV-1（人類免疫缺陷I 型病毒）為基礎(chǔ)發(fā)展起來的工具載體，其毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源目的基因所取代，屬于假型病毒（一次性感染能力而無復(fù)制產(chǎn)生新病毒能力）。將靶基因隨機(jī)整合到宿主的基因組中，并且能夠在細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)若干代，可以進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的篩選。被廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞系基因敲除、基因過表達(dá)、RNA干擾。
在轉(zhuǎn)染遺傳物質(zhì)到細(xì)胞基因組中的工作中，重組慢病毒載體是一個(gè)強(qiáng)大和有效的工具，基本操作規(guī)范如下：
1. 在實(shí)驗(yàn)室工作時(shí)，任何時(shí)候都必須穿著連體衣、隔離服或工作服；應(yīng)戴上合適的手套和口罩。
2. 病毒操作時(shí)最好使用生物安全柜。如果使用普通的超凈工作臺(tái)操作病毒，請(qǐng)不要打開風(fēng)機(jī)。
3. 所有的技術(shù)操作要按盡量減少氣溶膠和微小液滴形成的方式來進(jìn)行。如果出現(xiàn)病毒污染，請(qǐng)立即用70%的酒精加1%SDS溶液擦拭干凈。
4. 如需離心，應(yīng)使用密封性好的離心管，可用 Parafilm 膜封口后離心，而且最好使用組織或細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)的離心機(jī)。
5. 用顯微鏡觀察細(xì)胞感染情況時(shí)用遵從以下步驟：擰緊培養(yǎng)瓶或蓋緊培養(yǎng)板，并在使用70%乙醇清理所有受到污染的材料、標(biāo)本和培養(yǎng)物在廢棄或清潔再利用之前，必須清除污染。廢棄的含病毒的培養(yǎng)基加入84消毒液（1:20左右），浸泡一天后丟棄。接觸過病毒的槍頭，離心管，培養(yǎng)板等其他物品可用84消毒液稀釋液處理，也可以用煮沸處理半小時(shí)或高壓濕熱滅菌（121℃，30min）。
6. 手套用完后，應(yīng)先消毒再摘除，隨后必須洗手。