微量凱氏定氮法
在乳制品中的應(yīng)用
凱氮應(yīng)用
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簡介
本文介紹了一種測定乳制品總蛋白質(zhì)含量的簡便可靠的方法，按照“微氮"方法進(jìn)行樣品消化，顯著減少了化學(xué)試劑和消耗品的使用，從而帶來了生態(tài)和經(jīng)濟(jì)上的雙重優(yōu)勢。使用全自動凱氏定氮儀 K-375 和進(jìn)樣器 K-376 / K-377 按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行蒸汽蒸餾，隨后進(jìn)行電位滴定法進(jìn)行滴定。
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設(shè)備
尾氣吸收儀 K-415（114152331）
消解儀 K-449 （1154492000）
凱氏定氮儀 K-375/K-377（113751720）
樣品管 300 mL（037377）
分析天平（精度±0.1 mg）
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化學(xué)品與材料
化學(xué)品：
濃度 98% 的硫酸，默克公司（1007482500）
凱氏定氮片（11057980）
32% NaOH
2% 硼酸，pH 值調(diào)至 4.65
硫酸 0.01mol/L
為確保安全操作，請注意所有相關(guān)的材料安全數(shù)據(jù)表（MSDS）！
標(biāo)準(zhǔn)樣品：
蛋白質(zhì)含量標(biāo)為每 3.7g/100g 酸奶
蛋白質(zhì)含量標(biāo)注為每 9.7g/100g 夸克奶酪
標(biāo)簽上標(biāo)明蛋白質(zhì)含量為 32g/100g 帕爾馬干酪
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實驗流程
4.1 消化方法 - 樣品
按照 表1 中的說明，將每個樣本放入 300mL 的樣品管中。
加入 2 片催化片和 8mL 濃度為 96% 的硫酸。
準(zhǔn)備額外的空白和化學(xué)試劑，不包含樣品。
連接 K-415 與 K-449，以吸收消化過程中產(chǎn)生的酸性煙霧。
按照 表1 中所列參數(shù)啟動消解程序。
加熱步驟 | 溫度 [攝氏度] | 時間 [分鐘] |
預(yù)熱 | 350 | - |
1 | 420 | 120 |
冷卻 | - | 30 |
4.2 蒸餾與滴定
按照 表2 中所列參數(shù)蒸餾樣品。
表2： K-375/K-376 蒸餾和滴定的參數(shù)
4.3 計算
結(jié)果以氮的百分比計算得出。為了計算樣品中的蛋白質(zhì)含量，需將氮含量乘以特定樣品的蛋白質(zhì)系數(shù)。以下公式（1）、（2）和（3）用于計算結(jié)果。
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結(jié)果
5.1 色氨酸的回收率
表3 列出了色氨酸分析（含量＞99%）的氮測定結(jié)果及回收率。色氨酸的理論氮含量為 13.72%?；厥章试?8% - 102% 的規(guī)定范圍內(nèi)。
色氨酸 | mSample [g] | VSample [mL] | % NTry | 回收率 [%] |
示例 1 | 0.0283 | 14.220 | 13.53 | 98.65 |
示例 2 | 0.0302 | 15.289 | 13.67 | 99.67 |
平均值 [%] | - | - | 13.60 | 99.16 |
相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（%） | - | - | 0.73 | 0.73 |
空白體積的平均值 (VBlank) 為 0.3985 mL（n = 2）。
5.1 乳制品中蛋白質(zhì)的測定
乳制品中氮和蛋白質(zhì)含量的測定結(jié)果見 表4 至 表6。
表4：酸奶中氮和蛋白質(zhì)含量測定結(jié)果（標(biāo)示蛋白質(zhì)含量為 3.7g/100g）。
酸奶 | mSample [g] | VSample [mL] | % N | 百分比 P |
示例 1 | 0.258 | 6.821 | 0.68 | 4.34 |
示例 2 | 0.2545 | 6.306 | 0.63 | 4.04 |
示例 2 | 0.2702 | 6.591 | 0.63 | 4.00 |
平均值 [%] | - | - | 0.65 | 4.13 |
相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（%） | - | - | 4.58 | 4.58 |
空白體積的平均值 (VBlank) 為 0.381 毫升（n = 2）。
表 5：夸克奶酪（標(biāo)示蛋白質(zhì)含量 9.7g/100g）中氮和蛋白質(zhì)的含量。
夸克奶酪 | mSample [g] | VSample [mL] | % N | 百分比 P |
示例 1 | 0.1591 | 10.216 | 1.70 | 10.86 |
示例 2 | 0.179 | 10.94 | 1.63 | 10.37 |
示例 2 | 0.1444 | 9.019 | 1.64 | 10.48 |
平均值 [%] | - | - | 1.66 | 10.57 |
相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（%） | - | - | 2.40 | 2.40 |
表6： 帕爾馬干酪中氮和蛋白質(zhì)含量測定結(jié)果（標(biāo)示蛋白質(zhì)含量 32g/100g）
帕爾馬干酪 | mSample [g] | VSample [mL] | % N | 百分比 P |
示例 1 | 0.1261 | 22.684 | 4.92 | 31.37 |
示例 2 | 0.1168 | 20.877 | 4.88 | 31.10 |
示例 2 | 0.1411 | 25.052 | 4.86 | 31.03 |
平均值 [%] | - | - | 4.89 | 31.17 |
相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（%） | - | - | 0.57 | 0.57 |
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結(jié)論
使用消解儀 K-449 和全自動凱氏定氮儀 K-375 / K-376 通過電位滴定法測定乳制品中的氮和蛋白質(zhì)， 可獲得可靠且重現(xiàn)性好的結(jié)果，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低（RSD）。微量凱氏定氮法減少了消解過程中硫酸和催化劑的用量，也減少了蒸餾步驟中 NaOH 的用量?；瘜W(xué)試劑用量的節(jié)省為經(jīng)典凱氏定氮法帶來了經(jīng)濟(jì)和生態(tài)方面的雙重優(yōu)勢，同時又保持了其高精度和高準(zhǔn)確度。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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