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CY5.5-OVA|CY5.5-卵清蛋白的介紹

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CY5.5-卵清蛋白(Cy5.5 labeled ovalbumin)是一種重要的熒光標記物,由近紅外熒光染料CY5.5與卵清蛋白(ovalbumin,OVA)通過化學方法共價連接而成。以下是關于CY5.5-卵清蛋白的詳細介紹:

一、組成成分

CY5.5-卵清蛋白由兩部分組成:

  1. 近紅外熒光染料CY5.5

    • 性質(zhì):具有優(yōu)異的光學特性,其激發(fā)波長約為675nm,發(fā)射波長約為695~710nm,處于近紅外區(qū)域。

    • 作用:作為熒光標記物,使CY5.5-卵清蛋白在生物成像中具有更深的組織穿透能力和更低的背景自發(fā)熒光干擾。

  2. 載體蛋白卵清蛋白

    • 性質(zhì):一種常用的生物大分子載體,具有多個反應性位點,如賴氨酸殘基上的氨基,可以與CY5.5的活性基團(如NHS酯)進行共價連接。

    • 來源:通常從雞蛋清中提取,分子量約為43kDa。

    • 作用:作為CY5.5的載體,提高其在體內(nèi)的穩(wěn)定性和生物相容性。

二、合成方法

CY5.5標記卵清蛋白的過程通常包括以下幾個步驟:

  1. 將CY5.5-NHS酯溶解在少量無水有機溶劑(如DMSO或DMF)中,確保其在水溶液中不會快速水解。

  2. 在緩沖溶液中(如pH 8.0左右的PBS緩沖液)加入適量的卵清蛋白溶液。

  3. 緩慢加入CY5.5-NHS酯溶液到卵清蛋白溶液中,同時輕輕攪拌,以促進酯與蛋白質(zhì)氨基的偶聯(lián)反應。通常在室溫或冰浴條件下反應1~2小時。

  4. 調(diào)整pH值以保持在8.0附近,有助于提高酰胺鍵的形成效率。

  5. 使用凝膠過濾或透析的方法去除未反應的CY5.5-NHS酯和其他小分子。

  6. 純化后得到的CY5.5標記卵清蛋白可以通過吸光度和熒光光譜測定標記效率。

三、特性與應用

  1. 熒光特性:由于CY5.5染料的激發(fā)和發(fā)射波長處于近紅外區(qū)域,使得CY5.5-卵清蛋白在生物成像中具有更深的組織穿透能力和更低的背景自發(fā)熒光干擾,從而提高成像的清晰度和準確性。

  2. 光穩(wěn)定性:CY5.5染料在生理條件下穩(wěn)定,不易受到光漂白的影響,能夠保持長時間的熒光信號。這使得CY5.5-卵清蛋白在長時間的成像實驗中仍能保持穩(wěn)定的熒光強度,適用于活體成像和實時檢測。

  3. 生物兼容性:CY5.5是水溶性染料,易于與蛋白質(zhì)結(jié)合,且通常不會顯著影響蛋白質(zhì)的功能或結(jié)構(gòu)。卵清蛋白也具有良好的生物相容性,因此CY5.5-卵清蛋白在生物體內(nèi)應用中具有較高的安全性。

  4. 應用

    • 生物成像:可用于熒光顯微鏡觀察、流式細胞分析、蛋白質(zhì)印跡等應用中。通過與特定的抗體結(jié)合,可以用于檢測組織或細胞中的抗原,實現(xiàn)熒光成像和定量分析。

    • 藥物研發(fā):CY5.5-卵清蛋白的近紅外熒光發(fā)射特性使其能夠穿透生物組織,因此特別適合用于體內(nèi)成像和藥物分布、代謝等方面的研究。通過監(jiān)測CY5.5-卵清蛋白在體內(nèi)的分布和代謝情況,可以為藥物研發(fā)提供重要的信息。

    • 免疫研究:卵清蛋白作為常用的載體蛋白,具有良好的免疫原性。CY5.5-卵清蛋白可用于免疫學研究,如作為免疫原制備抗體、研究免疫反應等。

四、注意事項

  1. CY5.5-卵清蛋白通常僅用于科學研究實驗,不適合人類或獸醫(yī)使用。

  2. 在使用過程中應嚴格遵循實驗室操作規(guī)范,確保人身安全和實驗效果。

  3. 儲存時應在適當?shù)牡蜏貤l件下保存,以保持其穩(wěn)定性和活性。

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