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細胞轉染技術的兩個分類介紹
閱讀：406 發(fā)布時間：2023-12-25
細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產(chǎn)等生物學試驗中，其應用越來越廣泛。
細胞轉染是指將外源遺傳物質（DNA或RNA）導入真核細胞的技術。細胞轉染技術可分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩(wěn)定轉染。
瞬時轉染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達，但持續(xù)時間只有幾天（數(shù)天內大部分外源性 DNA 會在核酸酶作用下降解或被細胞分裂稀釋，一周后便無法再檢出）。使用超螺旋質粒 DNA 進行瞬時轉染的效率高，因為其能被細胞更高效地攝取。
穩(wěn)定轉染：外源性DNA可以整合至細胞基因組中，或者作為游離型質粒存在，并可傳遞至轉染細胞的子代。但通常只有單個或幾個拷貝的外源性DNA整合至穩(wěn)定轉染基因組中，因此穩(wěn)定轉染基因的表達水平一般低于瞬時轉染基因的表達水平。由于外源性DNA穩(wěn)定整合至基因組的概率很低，因此通常在用于轉染的DNA構建體中納入可篩選標記物（如對各種篩選藥物產(chǎn)生抗性的基因，或是可對待轉染細胞系有缺陷的必需基因進行補償?shù)幕颍?，然后在短暫的恢復期后對細胞施加適當?shù)暮Y選壓力。