為什么恒溫擴(kuò)增可取代變溫PCR？

依賴核酸序列的擴(kuò)增技術(shù)（NASBA)是在PCR基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù)，是由1對帶有T7啟動子序列的引物引導(dǎo)的連續(xù)、等溫、基于酶反應(yīng)的核酸擴(kuò)增技術(shù)，反應(yīng)在41℃進(jìn)行，可以在2h左右將模板RNA擴(kuò)增約109倍，比常規(guī)PCR法高1000倍，不需特殊的儀器。該技術(shù)一出現(xiàn)就被用于疾病的快速診斷和病人血清中HIV-1的定量檢測。盡管RNA的擴(kuò)增也可以使用反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)(通過反轉(zhuǎn)錄形成單鏈DNA模板)，NASBA相比則有自己的優(yōu)勢：可以在相對恒溫的條件下進(jìn)行（一般恒溫為41℃）。該技術(shù)用于醫(yī)學(xué)診斷，相對傳統(tǒng)的PCR技術(shù)更為穩(wěn)定，準(zhǔn)確。

多酶等溫快速擴(kuò)增（Multienzyme lsothermal Rapid Amplification，MIRA）技術(shù)，一種模擬生物體內(nèi)正常核酸擴(kuò)增過程，在37°C條件下依靠多種功能蛋白協(xié)同作用下實現(xiàn)核酸的快速擴(kuò)增。

以上是近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，基于核酸擴(kuò)增的診斷方法已大量建立并廣泛應(yīng)用于人類疾病的實驗室檢測中，恒溫擴(kuò)增技術(shù)便是其中一種，與其他的核酸擴(kuò)增技術(shù)相比，恒溫擴(kuò)增有快速、高效、特異的優(yōu)點且無需專用的設(shè)備，所以它一經(jīng)出現(xiàn)就被許多學(xué)者認(rèn)為是一種有可能與PCR媲美的檢測方法。當(dāng)前常見的等溫擴(kuò)增技術(shù)有環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)、鏈替代等溫擴(kuò)增技術(shù)、滾環(huán)等溫擴(kuò)增技術(shù)、依賴解旋酶等溫擴(kuò)增技術(shù)、依賴核酸序列等溫擴(kuò)增技術(shù)、單引物等溫擴(kuò)增技術(shù)和核酸快速等溫檢測放大等技術(shù)。為了更好地有選擇地開發(fā)利用這方面技術(shù)，現(xiàn)就這些等溫擴(kuò)增技術(shù)的原理、特點及應(yīng)用進(jìn)行簡要總結(jié)。