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中級(jí)會(huì)員 | 第3年

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ELISA試劑盒產(chǎn)品實(shí)拍
  • 發(fā)布時(shí)間2023-11-03
  • 播放次數(shù)100次
視頻簡介

產(chǎn)品類型和操作步驟:


ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑:


1.固相的抗原或抗體,


2.酶標(biāo)記的抗原或抗體,


3.酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀以及檢測的具備條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方法。


(一)雙抗體夾心法、


(二)一步法、


(三)間接法測抗體、


(四)競爭法。


試劑配制:


1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。


2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。


3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。


4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。


5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。


6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)


7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)


8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。


9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。


10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。


產(chǎn)品選型:

1是檢測抗體還是抗原。


2:檢測的結(jié)果是定性還是定量。


3是否需要檢測特異抗體的類型。


4:所用抗體/單克隆抗體的親和力/親和力怎么樣


操作步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)品的加樣 :設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;o 


2.加樣: 分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μ l,然后再加待測樣品10μ1(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。


3.加酶: 每孔加入酶標(biāo)試劑100μ1,空白孔除外。


4.溫育: 用封板膜封板后置37C溫育60分鐘。


5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。


6.洗滌: 小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。


7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μ1,再加入顯色劑B50μ1,輕輕震蕩混勻,37C避光顯色15分鐘。


8. 終止:每孔加終止液50μ1,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。


9.測定:以空白孔調(diào)零, 450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。


標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算:

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),0D 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的0D值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與0D值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的0D值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。


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