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讀板機可以進行吸光度測量、熒光測量等,每種都有不同的測量原理、特點和注意事項,所以我們分兩部分進行解釋。無論哪種情況,都需要單色(單波長)光,并且使用濾光器或單色儀來選擇波長。
1. 吸光度測量
通過用所需波長的光照射微孔板中的樣品并測量穿過另一側樣品的光的強度來確定吸光度。如果可以測定吸光度,則根據(jù)比爾-朗伯定律,吸光度與濃度成正比,因此可以通過將未知濃度的樣品與已知濃度的校準曲線樣品進行比較來確定其濃度。
但是,如果微孔板被劃傷或弄臟,或者樣品中存在氣泡,吸光度可能無法正確測量,并且可能會高于原始值。
2. 熒光測量
通過用特定波長(激發(fā)波長)的光照射微孔板中的樣品,測量從樣品發(fā)出的特定波長的熒光強度。這利用了熒光物質(zhì)的特性,熒光物質(zhì)通過吸收特定波長帶而變成激發(fā)態(tài),并在返回基態(tài)時發(fā)射能量。
這種能量以熱和光的形式發(fā)射,兩者都與濃度成正比,因此可以通過檢測光來量化。由于它檢測樣品中特定化學物質(zhì)本身發(fā)出的熒光,因此具有能夠進行高靈敏度和高精度測量的特點。