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蘇州珀羅汀生物技術(shù)有限公...

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無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)后零處理進(jìn)行BLI(Biolayer Interferometry)

閱讀:193      發(fā)布時(shí)間:2025-7-11
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近日,珀羅汀生物收到某藥企研發(fā)團(tuán)隊(duì)的反饋:使用兩款PLD無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)試劑(PLDK001、PLDK002),成功實(shí)現(xiàn)3個(gè)蛋白的高效表達(dá),并通過(guò)BLI檢測(cè)無(wú)細(xì)胞反應(yīng)后上清快速完成了功能性驗(yàn)證!


生物層干涉術(shù)(Biolayer Interferometry, BLI)是一種非標(biāo)記的、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的先進(jìn)技術(shù),主要用于生物分子間或是生物分子與小分子間相互作用分析。在蛋白與配體的相互作用檢測(cè)時(shí),基于傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)的蛋白樣品通常需要經(jīng)過(guò)復(fù)雜的細(xì)胞破碎、純化等前處理。然而在本案例中,通過(guò)無(wú)細(xì)胞表達(dá)技術(shù)獲得的重組蛋白,實(shí)現(xiàn)了上清液零處理直接BLI檢測(cè)!


無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)后零處理進(jìn)行BLI(Biolayer Interferometry)

圖1 :基于傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的BLI檢測(cè)與本案例基于無(wú)細(xì)胞表達(dá)(CFPS)的BLI檢測(cè)流程對(duì)比示意圖


本案例實(shí)驗(yàn)結(jié)果可謂亮點(diǎn)紛呈


1.高可溶表達(dá):SDS-PAGE清晰顯示,3個(gè)蛋白在無(wú)細(xì)胞表達(dá)上清液中均呈現(xiàn)強(qiáng)目的條帶(圖1),傳統(tǒng)大腸桿菌系統(tǒng)中易形成的包涵體難題被破解!


無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)后零處理進(jìn)行BLI(Biolayer Interferometry)


圖2: 三個(gè)蛋白在PLDK001、PLDK002試劑盒中表達(dá)的SDS-PAGE膠圖


2.低背景:蛋白3經(jīng)BLI(生物膜層干涉技術(shù))檢測(cè)顯示:帶His標(biāo)簽的目的蛋白與背景信號(hào)區(qū)分度高(圖3),表明表達(dá)產(chǎn)物背景干擾小,無(wú)需復(fù)雜純化即可直接用于下游結(jié)合實(shí)驗(yàn)。


無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)后零處理進(jìn)行BLI(Biolayer Interferometry)

圖3:BLI通過(guò)抗His捕獲傳感器可從表達(dá)上清中捕獲蛋白3


3.強(qiáng)親和活性:最令人振奮的是——蛋白2與其配體蛋白的BLI實(shí)時(shí)結(jié)合曲線顯示典型高效結(jié)合特征,表明該蛋白具有強(qiáng)親和活性!這種無(wú)細(xì)胞快速表達(dá)+BLI快速檢測(cè)親和活性的方案,將為藥物靶點(diǎn)蛋白篩選貢獻(xiàn)新速度。

無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)后零處理進(jìn)行BLI(Biolayer Interferometry)
無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)后零處理進(jìn)行BLI(Biolayer Interferometry)

圖4:蛋白2與其配體蛋白有強(qiáng)親和活性


無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù):推動(dòng)靶點(diǎn)蛋白開發(fā)的“高能引擎"





從基因到蛋白,再到活性驗(yàn)證, 珀羅汀無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)猶如“高能引擎",推動(dòng)靶點(diǎn)蛋白極速表達(dá),為藥物發(fā)現(xiàn)提供“無(wú)細(xì)胞速度"。對(duì)于分秒必爭(zhēng)的新藥研發(fā),速度即是壁壘,活性就是王-道!此次客戶的成功實(shí)踐,驗(yàn)證了珀羅汀無(wú)細(xì)胞表達(dá)平臺(tái)的三重價(jià)值:

打破表達(dá)壁壘——高難度蛋白輕松可溶表達(dá);

跳過(guò)純化瓶頸——表達(dá)上清直通活性檢測(cè);

壓縮研發(fā)周期——將傳統(tǒng)數(shù)周流程縮短至數(shù)天!


對(duì)比傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng),珀羅汀無(wú)細(xì)胞技術(shù)在此次案例中展現(xiàn)出壓倒性優(yōu)勢(shì):

無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)后零處理進(jìn)行BLI(Biolayer Interferometry)




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