無(wú)外泌體血清是一種可由多種細(xì)胞分泌的直徑為30-150nm的膜性小囊泡。經(jīng)研究后發(fā)現(xiàn)，其內(nèi)含有*的蛋白質(zhì)與核酸分子，所含成份與其細(xì)胞來(lái)源密切相關(guān)，這也決定了無(wú)外泌體血清的功能特異性，如抗原提呈、信號(hào)傳導(dǎo)或誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、細(xì)胞間通信、腫瘤轉(zhuǎn)移等。目前，無(wú)外泌體血清研究已經(jīng)成為臨床診斷與基礎(chǔ)醫(yī)生的新熱點(diǎn)。
無(wú)外泌體血清制備步驟：
1. 根據(jù)需要處理的血清體積選擇合適的轉(zhuǎn)子與超離管。
2. 在超凈工作臺(tái)，將普通血清置于超離管中，配平后，進(jìn)行熱封口。
3. 將封口后的超離管放于離心機(jī)轉(zhuǎn)子中，并加入相應(yīng)適配器然后擰緊轉(zhuǎn)頭蓋。
4. 設(shè)置離心程序：4℃，120,000 ×g，離心18小時(shí)（也有研究者選擇100,000 ×g離心18小時(shí)）。
5. 離心結(jié)束后，回收上清液，為避免污染，在超凈工作臺(tái)操作。
6. 收集得到無(wú)外泌體血清，并儲(chǔ)存于-20℃中備用。
注意事項(xiàng)請(qǐng)注意了：
1：離心后，血清外泌體會(huì)富集在管底和管壁；
2：吸取血清時(shí)，只吸取澄清部分的血清，并且遠(yuǎn)離上圖中標(biāo)記的區(qū)域；
3：吸取70-80%的澄清的血清；（注意：動(dòng)作慢，動(dòng)作輕）
4：其余的渾濁血清留作正常細(xì)胞的的營(yíng)養(yǎng)物添加使用，避免浪費(fèi)。
5：如果覺(jué)得純度不夠，再把離心后收集的血清做二次超速離心。
6：針對(duì)超速離心后的血清，必須進(jìn)行粒徑檢測(cè)（離心前樣品和離心后樣品），該數(shù)據(jù)可以放到文章補(bǔ)充材料中，用來(lái)證明無(wú)血清外泌體制備成功。
