一、簡(jiǎn)介

His標(biāo)簽蛋白（競(jìng)爭(zhēng)法）快速檢測(cè)試劑盒是基于膠體金側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)的蛋白半定量檢測(cè)試劑。主要結(jié)構(gòu)由樣品墊、金標(biāo)墊、層析膜、吸水紙、背板等組成。在層析膜上固定有金標(biāo)抗體的二抗（質(zhì)控線）和帶有His-tag的蛋白（檢測(cè)線）；在金標(biāo)墊上固定有膠體金標(biāo)記的抗His-Tag的單克隆抗體。當(dāng)待測(cè)樣品滴加到樣品墊時(shí)，通過(guò)毛細(xì)作用，液體向金標(biāo)墊移動(dòng)。當(dāng)不含有His-Tag蛋白的待測(cè)樣品通過(guò)金標(biāo)墊時(shí)，His-Tag金標(biāo)抗體隨著層流移動(dòng)到檢測(cè)線位置，與固定在檢測(cè)線上的帶有His-tag的蛋白發(fā)生特異性結(jié)合，并在檢測(cè)線上形成酒紅色條帶；當(dāng)含有His-Tag蛋白的待測(cè)樣品通過(guò)金標(biāo)墊時(shí)，His-Tag金標(biāo)抗體與待測(cè)樣本中的His-Tag蛋白發(fā)生特異性的結(jié)合，樣本中含有的His-Tag蛋白越多，與之結(jié)合的金標(biāo)His-Tag抗體越多，剩余的游離His-Tag金標(biāo)抗體越少，隨著層流移動(dòng)到檢測(cè)線位置，游離的His-Tag金標(biāo)抗體與固定在檢測(cè)線上的帶有His-tag的蛋白發(fā)生特異性結(jié)合，并在檢測(cè)線上形成淡淡的酒紅色條帶或者不顯帶。當(dāng)復(fù)合物移動(dòng)到質(zhì)控線時(shí)，His-Tag金標(biāo)抗體被包被在質(zhì)控線的金標(biāo)抗體二抗所捕獲，并在質(zhì)控線上形成酒紅色條帶。通過(guò)判讀層析膜上檢測(cè)線和質(zhì)控線是否顯色及顯色的強(qiáng)弱，判斷樣品中是否存在His-Tag蛋白。本試劑檢測(cè)下限為10ug/mL，即當(dāng)待測(cè)樣品中His-Tag蛋白的濃度達(dá)到10ug/ml及以上濃度時(shí)，檢測(cè)線的強(qiáng)度會(huì)被有效的削弱，顯示出淡淡的酒紅色條帶或不顯色。當(dāng)檢測(cè)樣品中His-Tag蛋白濃度在10ug/mL至100ug/mL時(shí)，檢測(cè)線顏色的深淺與樣品中His-Tag蛋白的濃度呈負(fù)相關(guān)。當(dāng)樣本中的His-Tag蛋白濃度達(dá)到100ug/ml以上時(shí)，檢測(cè)線發(fā)生消線即無(wú)肉眼可見條帶出現(xiàn)。

二、His標(biāo)簽蛋白（競(jìng)爭(zhēng)法）快速檢測(cè)試劑盒用途

原核表達(dá)系統(tǒng)、真核表達(dá)系統(tǒng)獲得的His-Tag蛋白產(chǎn)物，均可以使用本檢測(cè)試劑進(jìn)行快速檢測(cè)。

三、組成

1）檢測(cè)卡；2）稀釋液；3）說(shuō)明書

四、使用方法

1.將本試劑包裝打開，將檢測(cè)卡平放在生物安全柜臺(tái)面上；

2.待測(cè)樣本的預(yù)稀釋：

若待測(cè)標(biāo)簽蛋白濃度已知，則利用試劑配套的稀釋液直接稀釋樣本至30ug/ml；

若待測(cè)標(biāo)簽蛋白濃度未知，則利用試劑配套的稀釋液對(duì)來(lái)源于細(xì)菌裂解液的待測(cè)樣本進(jìn)行4倍稀釋，渦旋震蕩混勻；對(duì)于來(lái)源于哺乳細(xì)胞裂解液的待測(cè)樣本無(wú)需進(jìn)行預(yù)稀釋；

3.用微量移液器吸取20μl待檢標(biāo)本，滴加到樣品孔中；

4.向樣品孔中滴加50μL樣品稀釋液（滴瓶垂直滴加2滴），10-15分鐘后即可判讀結(jié)果。

注：建議每次檢測(cè)都設(shè)置一個(gè)陰性對(duì)照檢測(cè)卡（陰性對(duì)照卡加入的樣本應(yīng)同待測(cè)樣本有相同的基質(zhì)組成，并確定不含His-Tag蛋白），通過(guò)與陰性對(duì)照檢測(cè)卡檢測(cè)線顯色強(qiáng)弱的比對(duì)，可以更加直觀的得出實(shí)驗(yàn)結(jié)論。