如何選擇二抗

二抗：二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，上面通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點(diǎn)使得其在

免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中得以應(yīng)用廣泛，如western blot（通過(guò)與特異性抗體結(jié)合來(lái)鑒定蛋白質(zhì)），ELISA（以耦聯(lián)有酶的抗體或抗原為標(biāo)記來(lái)檢測(cè)特異

性的蛋白質(zhì)，尤其是相應(yīng)的抗原或抗體），免疫組織化學(xué)（檢測(cè)組織中的特異性抗原），免疫細(xì)胞化學(xué)（通過(guò)免疫學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞的抗原

組成），流式細(xì)胞術(shù)（通過(guò)檢測(cè)激光所激發(fā)熒光來(lái)鑒定分離不同類型的細(xì)胞）及免疫沉淀（通過(guò)抗原與抗體的特異性結(jié)合作用來(lái)分離相應(yīng)

抗原）。

1.二抗針對(duì)某一特定物種（如小鼠）的所有抗體均具有特異性，因而使用標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每一個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記，大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用

；此外，一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)二抗分子，從而使信號(hào)大大增強(qiáng)，提高了實(shí)驗(yàn)靈敏度。二抗可以耦聯(lián)有幾種不同的標(biāo)記，可以是酶

，熒光素，或生物素。

 二抗的種屬來(lái)源

一般來(lái)說(shuō)，不同的種屬來(lái)源與二抗的質(zhì)量沒有必然的聯(lián)系，來(lái)源于山羊的二抗與來(lái)源于驢的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒有太多的差別。

然而在一些特殊的實(shí)驗(yàn)里，如雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)里，如果其中一個(gè)一抗是山羊來(lái)源的，一個(gè)是小鼠來(lái)源的，則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的

二抗，這時(shí)候，二抗就不能選擇山羊或者小鼠來(lái)源的。選擇相應(yīng)的驢來(lái)源的二抗，就非常適合做類似雙標(biāo)的免疫實(shí)驗(yàn)。雙標(biāo)得2個(gè)都抗才行，

故選擇第3個(gè)種源的抗體。

2.選擇哪種形式的二抗，是整個(gè)IgG分子，F(xiàn)(ab')2片段，還是Fab片段？

整個(gè)IgG分子：此種抗體適用于多數(shù)情況。

F(ab')2片段：該種抗體是由兩個(gè)靠二硫鍵連接的用于結(jié)合抗原的Fab片段組成，這些抗體用在特定的情況中，如需要避免抗體與具有Fc受體

的細(xì)胞結(jié)合的情況。

Fab片段：它們只有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，一般用來(lái)封閉內(nèi)源性免疫球蛋白。

3.二抗的耦聯(lián)標(biāo)記

一般來(lái)講，耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過(guò)氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），熒光基團(tuán)（FITC, RRX, TR, PE）

和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。對(duì)于western blot和ELISA，常用的二抗是酶標(biāo)二抗，而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)（

細(xì)胞免疫化學(xué)，組織免疫化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)）中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過(guò)氧化酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的

二抗。如果想要更大程度的放大檢測(cè)信號(hào)，可以使用biotin/avidin檢測(cè)系統(tǒng)。在一些熒光檢測(cè)方案中，則需要選擇不同的熒光標(biāo)記；

而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。