細胞名稱：L6565小鼠白血病克隆細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

細胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)前的工作準備充分

包括耗材的處理、試劑的配置，無菌檢驗等等。

玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿（細胞瓶、裝營養(yǎng)液的瓶子、小青m素瓶等）要先用洗衣粉刷干凈（注意死角），然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗 10 遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎，160℃ 干烤 2 h 待用。

試劑配置。細胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。

無菌檢驗。主要采用過濾除菌：如抗生素、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉等。有些可以采用高壓滅菌，如 PBS、D-Hank's等。

試劑分裝保存包括營養(yǎng)液、血清等。

血清特別重要。血清必須貯存于 –20℃，如果一次無法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中，甚至置青m素瓶保存。一般廠商提供的血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。（一般情況下不影響細胞培養(yǎng)）

瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

YS1099P小鼠血管外膜成纖維原代細胞

YS1100P小鼠大隱靜脈平滑肌原代細胞

YS1101P小鼠冠狀動脈平滑肌原代細胞

YS1102P小鼠大隱靜脈內(nèi)皮原代細胞

YS1103P小鼠冠狀動脈內(nèi)皮原代細胞

YS1104P小鼠滑膜原代細胞

YS1105P小鼠骨骼肌原代細胞

YS1106P小鼠真皮成纖維原代細胞

YS1107P小鼠軟骨原代細胞

YS1108P小鼠破骨原代細胞

YS1109P小鼠前脂肪原代細胞

YS1110P小鼠成骨原代細胞

YS1111P小鼠關(guān)節(jié)軟骨原代細胞

YS1112P小鼠表皮角質(zhì)形成原代細胞

YS1113P小鼠腦膜原代細胞

YS1114P小鼠海馬神經(jīng)元原代細胞

YS1115P小鼠腦微血管內(nèi)皮原代細胞

YS1116P小鼠腦成纖維原代細胞

YS1117P小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)原代細胞

YS1118P小鼠小腦顆粒原代細胞

YS1119P小鼠嗅鞘原代細胞

YS1120P小鼠視網(wǎng)膜Muller原代細胞

YS1121P小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)原代細胞

YS1122P小鼠角膜成纖維原代細胞

YS1123P小鼠睪丸支持原代細胞

YS1124P小鼠腹腔巨噬原代細胞

YS1125P小鼠心臟微血管內(nèi)皮原代細胞

YS1126P小鼠肝外膽管上皮原代細胞

YS1127P小鼠骨髓間充質(zhì)干原代細胞

YS1128P小鼠肝枯否原代細胞

YS1129P小鼠胚胎成纖維原代細胞

YS1130P小鼠脂肪間充質(zhì)干原代細胞

YS1131P小鼠神經(jīng)干原代細胞

YS1132P小鼠骨髓來源內(nèi)皮祖原代細胞

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