目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>試劑盒>>檢測試劑盒>> TE02635´-核苷酸酶(5´-NT)檢測試劑盒(鉬藍(lán)比色法)
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
---|---|---|---|
貨號 | TE0263 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
5?-核苷酸酶(5?-NT或NTP)廣泛分布于肝臟、膽道及其他各種組織中,該酶活性變化常與ALP活性相平行。但在骨骼系統(tǒng)的疾病
中,如腫瘤骨轉(zhuǎn)移、畸形性骨炎、甲亢、佝僂病等,ALP活力增高,但是5?-NT活力正常,所以對于ALP活力提高的情況,
測定5?-NT活力有助于判斷ALP活力增高原因是肝膽系統(tǒng)疾病還是骨骼系統(tǒng)疾病。
5′-核苷酸酶(5′-NT)檢測試劑盒(鉬藍(lán)比色法)的檢測原理為5?-核苷酸酶能催化5?-磷酸腺苷(AMP)水解,生成腺苷和
磷酸,后者與鉬酸銨反應(yīng)生成鉬藍(lán),可用比色法測定無機(jī)磷的含量,計算5?-NT活性,利用鎳離子能選擇性的抑制5?-NT的特性
,在測定管不加人抑制劑鎳離子,測出的活性為ALP和5?-NT總活性,在對照管加入鎳離子,可以測出ALP的活性,
測定管的酶活性減去對照管的酶活性即獲得5?-NT活性,通過酶標(biāo)儀檢測680nm處吸光度。5?-核苷酸酶的檢測對于研究自由基
代謝平衡,抗衰老和腫瘤發(fā)病機(jī)制具有一定的價值。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
操作步驟(僅供參考):
自備材料:
1、蒸餾水
2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管
3、低溫離心機(jī)、恒溫箱或水浴鍋、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板
操作步驟(僅供參考):
1、準(zhǔn)備樣品∶
①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉,加入2.5ml PAL Lysis Buffer,冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿,4℃ 10000r/min
離心15~20min,留取上清液,-20℃凍存,用于苯丙氨解氨酶的檢測。
②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定,-20℃凍存,用于苯丙解氨的檢測。
③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液,如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿,4℃ 10000r/min離心15~20min,取上清液,
-20℃凍存,用于苯丙酸解氨酶的檢測。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶,可以使用蒸餾水或PAL
Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2、PAL加樣∶
取96孔板,按照下表設(shè)置對照孔、測定孔,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并
注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定,樣品的檢測最好能設(shè)置2平行孔,
求平均值。
加入物(μl)對照孔測定孔
蒸餾水150100
待測樣本5050
PAL Assay Buffer-50
3、PAL檢測︰
以對照孔為對照(調(diào)零),酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為 A測定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h,立即加入10μl PAL終止
液終止反應(yīng)(備選方案),以對照孔為對照調(diào)零,酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。
注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟,可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對照孔為對照調(diào)零,酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定
孔的吸光度。
注意事項∶
1、待測樣品中不能含有酶抑制劑,同時需避免反復(fù)凍融。
2、獲得上清液為PAL酶液,應(yīng)盡快檢測,亦可-20°℃保存。
3、如果沒有可測定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板,也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿,但應(yīng)注意比色杯的最小檢測體積。
4、每次檢測指標(biāo)不宜過多,否則操作時間不一,有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
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52722P52722pCMV-CEP19(human)-EGFP-Neo
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52724P52724pmini35S-Rluc-CmR
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52728P52728pLV3-U6-PGM5-AS1(human)-lncRNA-shRNA3-CopGFP-Puro
52729P52729pLV3-U6-DUOXA1(human)-shRNA1-CopGFP-Puro
52730P52730pLV3-U6-PGM5-AS1(human)-lncRNA-shRNA2-CopGFP-Puro
52731P52731pLV3-U6-SLC1A3(human)-shRNA1-CopGFP-Puro
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52734P52734pLV3-U6-BUD23(human)-shRNA1-CopGFP-Puro
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52739P52739pLV3-U6-FDX1(human)-shRNA3-CopGFP-Puro
52740P52740pLV3-U6-PODXL2(human)-shRNA3-CopGFP-Puro
52741P52741pCMV-NLRP14(human)-3×FLAG-Neo
52742P52742pCMV-CHAT(human)-3×FLAG-Puro
52743P52743pLV3-U6-JAK2(human)-sgRNA1-sgRNA2-Cas9-EGFP
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52745P52745pLV2-CMV-TRIM41(human)-Myc-Puro
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)