目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>常規(guī)試劑>>試劑>> C1601加A聚合酶(E.coli)試劑
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100U/1000U |
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貨號 | C1601 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
加A聚合酶(E.coli)試劑為高效加A聚合酶,該酶以RNA為模板在RNA的3′末端加入20~200個A堿基??蓱?yīng)用于增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性,
及microRNA加A尾,為cDNA合成提供oligo-dT引物結(jié)合位點(diǎn)等。生產(chǎn)的PolyA聚合酶是E.coli來源的,
該酶是以單鏈RNA 作為模板,ATP作為底物進(jìn)行聚合反應(yīng)的。
組分
組分名稱數(shù)量
Poly(A) Polymerase(5U/μl)20 μl/200 μl
10XEPAP Reaction Buffer500 μl
10 mM ATP100 μl/500 μl
25 mM MnCl2500 μl
來源
重組表達(dá)的E.coli來源的Poly(A)聚合酶。
單位定義
在37℃、pH7.9 的條件下,以ATP 為底物,10 分鐘內(nèi)把1 nmol的AMP 聚合到RNA上所需要的酶量定義為1個活性單位(U)。
應(yīng)用
RNA 3' 標(biāo)記增強(qiáng)RNA穩(wěn)定性microRNA加A尾,為cDNA合成提供oligo-dT引物結(jié)合位點(diǎn)
儲存
-20°C可保存2年。
加A聚合酶(E.coli)試劑恒溫擴(kuò)增使用策略及實(shí)例展示
應(yīng)用實(shí)例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果,可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。
應(yīng)用實(shí)例2: 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略,在反應(yīng)結(jié)束后,倒置反應(yīng)管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,陰性表現(xiàn)出橙色,區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。
應(yīng)用實(shí)例3:A3825-01 紅黃變色反應(yīng)(肉眼觀察)
以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起
始前,下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。
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