Endonuclease IV 試劑又叫Nfo，來源于E.coli,參與DNA損傷修復。核酸內(nèi)切酶IV可識別雙鏈DNA分子上的脫嘌呤/脫嘧啶（AP）位點，并切割 AP 位點 5′ 端的第一個磷酸二酯鍵，產(chǎn)生 3′ 羥基和 5′ 脫氧核糖磷酸末端(deoxyribose phosphate, dRP)。另外該酶還具有3′二酯酶活性，能從 DNA 的 3′末端釋放磷酸甘油醛、完整的脫氧核糖 5′-磷酸和磷酸。該酶的最佳底物為AP雙鏈DNA，但對AP單鏈DNA也有一定活性。

單位定義

一單位指在10µl反應體系中，37°C反應15min，切割1 pmol 含一個AP位點的34mer寡核苷酸雙鏈，所需要的酶量。

酶儲存液

50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 50% Glycerol.

熱失活

85°C 20min。

儲存

置于-20°C可保存2年，避免反復凍融。

Endonuclease IV 試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結(jié)束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結(jié)果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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