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細(xì)胞計數(shù)板的原理和使用方法
- 準(zhǔn)備工作
準(zhǔn)備細(xì)胞計數(shù)板、蓋玻片、移液器、細(xì)胞懸液等。
確保計數(shù)板和蓋玻片清潔、干燥,無劃痕。
- 制備細(xì)胞懸液
將待計數(shù)的細(xì)胞樣品制備成均勻的細(xì)胞懸液??梢酝ㄟ^輕輕吹打、攪拌或使用適當(dāng)?shù)姆稚﹣泶_保細(xì)胞均勻分散。
- 加樣
使用移液器吸取適量的細(xì)胞懸液,小心地滴加在計數(shù)板的計數(shù)區(qū)域上。注意不要產(chǎn)生氣泡,也不要讓液體溢出計數(shù)區(qū)域。
通常在計數(shù)板的兩側(cè)分別滴加細(xì)胞懸液,然后輕輕蓋上蓋玻片,使其與計數(shù)板緊密貼合。
- 顯微鏡觀察
將計數(shù)板放在顯微鏡的載物臺上,使用適當(dāng)?shù)奈镧R進行觀察。一般使用低倍物鏡(如 10×)找到計數(shù)區(qū)域,然后切換到高倍物鏡(如 40×)進行細(xì)胞計數(shù)。
- 計數(shù)細(xì)胞
計數(shù)板上通常有兩種類型的方格:大方格和小方格。大方格又被分為多個小方格。
計數(shù)時,只計數(shù)位于大方格四個角和中央的中方格內(nèi)的細(xì)胞。對于壓線的細(xì)胞,只計數(shù)上側(cè)和左側(cè)線的細(xì)胞,避免重復(fù)計數(shù)。
分別計數(shù)不同區(qū)域的細(xì)胞,取平均值以提高計數(shù)的準(zhǔn)確性。
- 計算細(xì)胞濃度
根據(jù)計數(shù)板的規(guī)格和計數(shù)的細(xì)胞數(shù)量,可以計算出細(xì)胞懸液的濃度。
例如,如果計數(shù)板上一個大方格的體積為 0.1mm3,計數(shù)了 5 個大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)為 N,則細(xì)胞濃度(個 /mL)=N×10?。
- 清洗和保存
計數(shù)完畢后,及時清洗計數(shù)板和蓋玻片,避免細(xì)胞殘留影響下次使用。
將計數(shù)板和蓋玻片干燥后,存放在清潔、干燥的地方。