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賽默飛Thermo實(shí)時熒光定量PCR儀 CFX96 全面介紹
實(shí)時熒光定量PCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction, qPCR）是一種基于熒光信號檢測的分子生物學(xué)技術(shù)，用于實(shí)時監(jiān)測和定量分析DNA或RNA擴(kuò)增過程。賽默飛（Thermo Fisher Scientific）作為生命科學(xué)技術(shù)公司，其CFX96實(shí)時熒光定量PCR儀以高靈敏度、高準(zhǔn)確性和靈活性廣受認(rèn)可，是一款適用于科研、臨床診斷以及工業(yè)應(yīng)用的高性能儀器。本文將從CFX96的特點(diǎn)、技術(shù)參數(shù)、操作流程及應(yīng)用領(lǐng)域等方面，全面介紹這一儀器。
一、儀器概述
賽默飛CFX96實(shí)時熒光定量PCR儀是一款以96孔板為基礎(chǔ)的高通量、高靈敏度的qPCR儀器。CFX96專為滿足基因檢測、表達(dá)分析、病原體檢測、基因分型及突變研究等多種實(shí)驗(yàn)需求而設(shè)計。其核心特點(diǎn)是擁有強(qiáng)大的光學(xué)檢測系統(tǒng)、快速高效的溫控系統(tǒng)以及直觀易用的軟件支持，為用戶提供了靈活的實(shí)驗(yàn)方案和可靠的數(shù)據(jù)支持。
CFX96兼容多種熒光標(biāo)記體系（如SYBR Green、TaqMan探針等），具有開放式平臺設(shè)計，適應(yīng)性強(qiáng)。儀器通過精準(zhǔn)的熒光信號檢測實(shí)現(xiàn)對樣品擴(kuò)增過程的實(shí)時監(jiān)控，為科學(xué)研究提供精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
二、主要特點(diǎn)
1. 多通道光學(xué)系統(tǒng)
CFX96配備了先進(jìn)的5通道光學(xué)檢測系統(tǒng)，可同時監(jiān)測多達(dá)5種熒光信號。這種多通道設(shè)計支持多靶標(biāo)檢測，使得單次實(shí)驗(yàn)?zāi)軌驒z測多種基因，為基因表達(dá)研究和復(fù)雜分子診斷提供了強(qiáng)大的工具。
2. 高靈敏度和寬動態(tài)范圍
CFX96采用高性能光學(xué)檢測模塊，能夠檢測低至單拷貝的DNA或RNA，靈敏度。同時，其寬動態(tài)范圍允許從高濃度到低濃度樣品的準(zhǔn)確定量分析，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
3. 快速高效的溫控系統(tǒng)
CFX96使用Peltier加熱模塊，提供了快速升降溫的能力，使PCR反應(yīng)更高效。其溫控均一性可達(dá)±0.2℃，在樣品間提供一致的擴(kuò)增條件，確保數(shù)據(jù)的可靠性。
4. 靈活的試劑兼容性
CFX96是一款開放式平臺，支持多種試劑體系，如SYBR Green染料、TaqMan探針和分子信標(biāo)等。用戶可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇適合的試劑和耗材，降低實(shí)驗(yàn)成本，同時提高實(shí)驗(yàn)設(shè)計的靈活性。
5. 用戶友好的軟件系統(tǒng)
CFX96配備了強(qiáng)大的配套軟件，支持以下功能：
絕對定量：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法確定未知樣品的濃度；
相對定量：分析不同條件下目標(biāo)基因的表達(dá)變化；
基因分型：區(qū)分不同基因型；
熔解曲線分析：用于區(qū)分特異性擴(kuò)增和非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物；
突變分析：用于基因突變位點(diǎn)檢測。
軟件界面簡潔直觀，實(shí)驗(yàn)設(shè)置和數(shù)據(jù)分析功能豐富，降低了用戶的操作難度。此外，軟件支持實(shí)驗(yàn)報告自動生成和多種數(shù)據(jù)導(dǎo)出格式，便于實(shí)驗(yàn)結(jié)果分享和歸檔。
6. 高通量能力
CFX96支持96孔板格式，適合中高通量實(shí)驗(yàn)需求。其快速PCR模式可顯著縮短實(shí)驗(yàn)時間，為時間緊迫的實(shí)驗(yàn)提供了解決方案。
7. 緊湊設(shè)計與多功能性
CFX96設(shè)計緊湊，占用實(shí)驗(yàn)室空間小，適合各類實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。其靈活性和多功能性使其在科研和應(yīng)用實(shí)驗(yàn)中都表現(xiàn)出色。
三、技術(shù)參數(shù)
1. 光學(xué)性能
光學(xué)系統(tǒng)：5通道獨(dú)立光學(xué)檢測；
熒光染料：支持SYBR Green、FAM、HEX、VIC、ROX、Texas Red、Cy5等多種熒光標(biāo)記；
動態(tài)范圍：可檢測10個數(shù)量級；
靈敏度：單拷貝靶標(biāo)檢測。
2. 溫控性能
樣品模塊：96孔板；
溫控范圍：4℃至99.9℃；
溫控均一性：±0.2℃；
升降溫速度：最高可達(dá)5℃/秒。
3. 數(shù)據(jù)分析
分析功能：支持標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制、Ct值計算、熔解曲線分析、基因分型等；
導(dǎo)出格式：兼容.xlsx、.txt、.pdf等多種格式。
4. 兼容性
試劑：支持多種熒光染料和探針試劑；
耗材：適配標(biāo)準(zhǔn)96孔板及PCR管。
5. 尺寸與重量
儀器尺寸：約33 cm × 50 cm × 50 cm；
重量：約30 kg。
四、操作流程
1. 樣品制備
從實(shí)驗(yàn)材料（如組織、血液、細(xì)胞）中提取DNA或RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA（若為RNA樣品）。配置PCR反應(yīng)體系，包括引物、探針或熒光染料、反應(yīng)緩沖液及模板DNA或cDNA。
2. 儀器設(shè)置
打開CFX96儀器，啟動軟件；
根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計選擇檢測模式（SYBR Green、TaqMan探針等）；
配置擴(kuò)增程序，包括退火溫度、循環(huán)次數(shù)等；
分配熒光通道和目標(biāo)基因信息。
3. 實(shí)驗(yàn)運(yùn)行
將樣品加載至96孔板中并密封，將樣品板放入儀器中，啟動實(shí)驗(yàn)程序。CFX96將實(shí)時監(jiān)測擴(kuò)增過程并記錄熒光信號。
4. 數(shù)據(jù)分析
實(shí)驗(yàn)完成后，軟件自動生成擴(kuò)增曲線、Ct值和熔解曲線等實(shí)驗(yàn)結(jié)果。用戶可以進(jìn)一步分析數(shù)據(jù)，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求導(dǎo)出或保存結(jié)果。
五、應(yīng)用領(lǐng)域
CFX96實(shí)時熒光定量PCR儀因其高靈敏度、多功能性和靈活性，被廣泛應(yīng)用于以下領(lǐng)域：
1. 基因表達(dá)研究
利用相對定量方法，研究目標(biāo)基因在不同條件下的表達(dá)水平，為基因功能研究和生物學(xué)機(jī)制探索提供數(shù)據(jù)支持。
2. 病原體檢測
檢測和定量分析微生物、病毒和其他病原體的核酸，廣泛應(yīng)用于傳染病診斷、食品安全檢測及環(huán)境監(jiān)測。
3. 基因分型
通過熒光信號區(qū)分不同基因型，應(yīng)用于個體化醫(yī)療、遺傳病篩查和藥物基因組學(xué)研究。
4. 突變分析
檢測單核苷酸多態(tài)性（SNP）和基因突變，用于癌癥研究、藥物開發(fā)及精準(zhǔn)醫(yī)療。
5. 分子診斷
CFX96在遺傳性疾病檢測、腫瘤標(biāo)志物分析和藥物靶點(diǎn)研究中具有重要作用，為分子診斷領(lǐng)域提供技術(shù)支持。
6. 藥物研發(fā)
支持高通量基因表達(dá)篩選和藥物毒理學(xué)研究，用于分析藥物對基因表達(dá)的影響和潛在靶點(diǎn)的篩選。
六、優(yōu)勢總結(jié)
高性能光學(xué)系統(tǒng)：CFX96支持多通道實(shí)時檢測，提供精確可靠的數(shù)據(jù)。
靈活開放的設(shè)計：兼容多種試劑和耗材，適應(yīng)不同實(shí)驗(yàn)需求。
高通量能力：96孔板設(shè)計適合中高通量實(shí)驗(yàn)，支持快速模式。
用戶友好軟件：操作簡單，數(shù)據(jù)分析功能強(qiáng)大，適合不同層次用戶。
廣泛應(yīng)用領(lǐng)域：涵蓋基礎(chǔ)研究、臨床診斷及工業(yè)應(yīng)用。
七、總結(jié)
賽默飛CFX96實(shí)時熒光定量PCR儀是一款高性能、多功能、靈活的qPCR儀器，適用于多種分子生物學(xué)研究和臨床診斷需求。其先進(jìn)的光學(xué)檢測技術(shù)、高靈敏度、寬動態(tài)范圍和高通量實(shí)驗(yàn)?zāi)芰?，使其成為基因檢測、病原體分析和精準(zhǔn)醫(yī)療研究的理想選擇。CFX96不僅能滿足現(xiàn)代科研對高精度數(shù)據(jù)的需求，也能在未來的分子診斷和生物技術(shù)開發(fā)中繼續(xù)發(fā)揮重要作用，為推動科學(xué)進(jìn)步提供強(qiáng)有力的支持。
