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Thermo Fisher（賽默飛）Countess 3 FL細胞計數(shù)儀——光立方與GFP檢測的結合
Countess 3 FL細胞計數(shù)儀與光立方概念
賽默飛的Countess 3 FL細胞計數(shù)儀是一款高度智能化、支持多通道熒光檢測的自動細胞計數(shù)儀。光立方（Light Cube） 是該儀器中的一個核心技術組件，用于支持多種熒光染料的高效檢測和分析。光立方內置了激發(fā)光源和熒光濾光片，能夠針對特定熒光信號（如 GFP）進行靈敏捕獲和分析。
GFP（Green Fluorescent Protein，綠色熒光蛋白） 是熒光生物標記中的分子，廣泛應用于基因編輯、細胞轉染和標記特定細胞亞群等實驗。
Countess 3 FL通過其光立方技術，可以精準檢測 GFP 發(fā)出的綠色熒光信號，實現(xiàn)對 GFP 標記細胞的高效篩選與計數(shù)。
光立方的原理與功能
光立方是Countess 3 FL儀器中負責熒光檢測的核心模塊。它包括以下兩個關鍵部件：
激發(fā)光源：
為熒光染料提供激發(fā)能量，常使用LED作為激發(fā)光源。
GFP的激發(fā)光波長范圍為 470 nm（藍光）。
熒光濾光片：
用于選擇性捕捉熒光染料發(fā)射的特定波長。
GFP的發(fā)射光波長為 510 nm（綠色光），光立方會精準過濾出這一波長的熒光信號。
光立方的特點：
靈活性強：不同的光立方可對應不同的熒光標記染料（如 GFP、RFP、DAPI 等），用戶可以根據(jù)實驗需求進行快速更換。
精確性高：每個光立方經(jīng)過嚴格校準，能夠高效分辨微弱熒光信號。
易操作：光立方模塊的插拔設計簡單，用戶無需復雜調整即可完成更換。
GFP檢測的應用場景
GFP作為標記蛋白，常用于以下實驗場景，而Countess 3 FL的光立方技術能夠提供高靈敏度的檢測支持：
1. 轉染效率評估
在基因編輯或轉染實驗中，科研人員通常會使用 GFP 作為報告基因。Countess 3 FL能夠：
精確計數(shù) GFP 陽性細胞的數(shù)量。
快速計算轉染效率（GFP 陽性細胞數(shù)/總細胞數(shù)）。
2. 熒光標記細胞的篩選
通過 GFP 標記特定細胞亞群（如腫瘤細胞或免疫細胞），Countess 3 FL可快速識別 GFP 陽性細胞并輸出數(shù)量比例，為細胞分選和后續(xù)實驗提供數(shù)據(jù)支持。
3. 基因表達分析
GFP常用于監(jiān)測目標基因的表達水平。Countess 3 FL結合其熒光檢測功能，能夠高效量化 GFP 表達的強度與細胞數(shù)量。
4. 細胞追蹤與動態(tài)研究
在細胞追蹤實驗中，GFP用于標記細胞遷移或分化行為。Countess 3 FL的熒光模塊能夠捕捉標記細胞的實時狀態(tài)，并提供數(shù)據(jù)分析。
Countess 3 FL的檢測流程（以GFP為例）
樣本制備：
將含有 GFP 標記的細胞樣本制備為懸液，濃度推薦為 1 × 10? 至 1 × 10? 個細胞/mL。
根據(jù)實驗需求，可加入臺盼藍進行活力分析。
樣本加載：
使用專用計數(shù)載片，取 10 µL 樣本并加載至載片中，確保樣本分布均勻。
選擇檢測模式：
插入含 GFP 檢測功能的光立方。
在儀器界面選擇 GFP 通道（470/510 nm）進行熒光檢測。
結果讀取與分析：
儀器自動對樣本進行圖像捕獲和熒光分析，顯示 GFP 陽性細胞的數(shù)量和總細胞數(shù)。
系統(tǒng)自動計算 GFP 陽性比例，并生成數(shù)據(jù)報告。
數(shù)據(jù)存儲與導出：
將實驗結果通過 USB 導出為 Excel 文件或高清圖像，用于后續(xù)分析或歸檔。
Countess 3 FL光立方支持的熒光染料
除了 GFP 外，Countess 3 FL還支持以下常見熒光染料：
RFP（紅色熒光蛋白）：檢測波長范圍為 535/615 nm。
DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）：用于染色細胞核，檢測波長為 360/460 nm。
mCherry：另一種紅色熒光蛋白，常用于與 GFP 組合實驗。
科研人員可根據(jù)實驗需求選擇相應的光立方，并靈活切換不同的熒光檢測模式。
技術優(yōu)勢總結
GFP檢測的核心優(yōu)勢：
靈敏度高：光立方模塊對 GFP 熒光信號的檢測具有靈敏度，即使熒光信號較弱也能準確識別。
多功能性：不僅支持 GFP 標記檢測，還可同時進行細胞計數(shù)和活力分析。
高效性：檢測時間短，每個樣本僅需幾秒即可完成分析。
便捷性：光立方設計可快速更換，無需復雜的硬件調整。
高分辨率成像：支持高清細胞圖像捕捉，實驗結果更直觀。
Thermo賽默飛 3FL細胞計數(shù)儀光立方應用領域
細胞生物學：研究細胞增殖、分化及遷移。
基因編輯與轉染研究：評估轉染效率、基因表達水平。
免疫學與腫瘤學：篩選 GFP 標記的免疫細胞或腫瘤細胞。
藥物篩選：分析藥物對 GFP 陽性細胞的影響。
Thermo賽默飛 3FL細胞計數(shù)儀光立方總結
賽默飛Countess 3 FL細胞計數(shù)儀通過其光立方技術和多通道熒光檢測功能，為 GFP 標記實驗提供了高效、精確、便捷的解決方案。這款儀器不僅提升了細胞計數(shù)和熒光分析的效率，還能滿足各種復雜實驗需求，是生命科學研究領域的實驗室工具。
