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NobleRyder C9208 Rosetta (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞Rosetta (DE3)

產(chǎn)品貨號(hào)：C9208

產(chǎn)品名稱：Rosetta (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞Rosetta (DE3)

英文名稱：Rosetta (DE3)

產(chǎn)品規(guī)格：10*100ul /20*100ul

Rosetta (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

外觀(性狀)：干冰運(yùn)輸，需加干冰費(fèi)。

儲(chǔ)存條件：液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個(gè)月

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder C9208 Rosetta (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞Rosetta (DE3)是采用大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)107cfu/µg，-70℃保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

基因型: F-ompThsdSB(rB- mB-)galdcmlacY1(DE3)pRARE(argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL)(Camr)

特點(diǎn):該菌株是攜帶氯mei素抗性質(zhì)粒BL21的衍生菌，補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的6種稀有密碼子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC, GGA)對(duì)應(yīng)的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。

操作方法：（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）

1、將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化，以下實(shí)驗(yàn)以100ul感受態(tài)細(xì)胞為例。

2、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置30分鐘。

3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置2-3分鐘注意不要搖動(dòng)離心管。

4、向離心管中加入500ul無(wú)菌無(wú)抗的SOC或LB培養(yǎng)基，37℃180rpm振蕩培養(yǎng)1小時(shí)。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

5、取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時(shí)。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取100ul左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300ul的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過(guò)多菌液可以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過(guò)離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少，可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項(xiàng)：

1、感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。

2、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來(lái)影響。

3、轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過(guò)多或體積過(guò)大反而會(huì)

降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4、轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5、為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最di。

Rosetta (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建

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