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諾博萊德 血小板膜蛋白提取試劑盒

血小板膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P4918

產(chǎn)品名稱：血小板膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：血小板膜蛋白提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P4918 血小板膜蛋白提取試劑盒

適用樣本：動(dòng)物血小板

產(chǎn)品介紹

血小板膜蛋白提取試劑盒適用于從各種動(dòng)物血小板中提取膜蛋白。提取過程簡單方便，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性 分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。 本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

使用前請注意：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品介紹：

血小板膜蛋白提取試劑盒適用于從各種動(dòng)物血小板中提取膜蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至30min。

2. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3. 紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

操作步驟：

一、使用注意事項(xiàng)

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

二、血小板膜蛋白提取

1. 提取液準(zhǔn)備：

每500μL冷的蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每500μL蛋白溶解液C中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取1-5mLACD抗凝血，室溫200g離心10min。

3. 收集上層血漿，棄下層血液細(xì)胞沉淀。

4. 上層血漿室溫3000g離心10min，棄上清，收集沉淀。

5. 沉淀中加入500μL提取液B洗滌一次，3000g離心10min，棄上清，收集沉淀。

6. 沉淀中加入300-500μL冷的蛋白提取液A，充分混勻后，在4℃條件下振蕩20-30min。

7. 在4℃，12000g條件下離心10min，取上清。

8. 在37℃水浴10min。

9. 在37℃，1000g離心3min。

10. 此時(shí)液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部的下層，大約30-50μL液體。

11. 用1-2倍體積的膜蛋白溶解液C溶解該液體，即得血小板膜蛋白樣品。

12. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見問題分析：

1. 蛋白濃度低?

血小板膜蛋白豐度較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大血小板的上樣量。

處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解wan全，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑的處理時(shí)間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2. 用什么方法定量蛋白?

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3. 提取的蛋白具有活性嗎?

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

4. 膜蛋白電泳沒有條帶?

膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進(jìn)行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。

膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進(jìn)行蛋白定量。

蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保溫30min。

蛋白Loading buffer中SDS終濃度含量可以提高至3%-10%。

有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。

電泳時(shí)最后采用低電壓低電流電泳。

注意事項(xiàng)：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實(shí)驗(yàn)完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸

血小板膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品訂購信息：

P4918  血小板膜蛋白提取試劑盒  50T/100T